Culturing Murine Spiral Ganglion Neuron Explants on Multielectrode Arrays(다전극 어레이에 대한 쥐 나선형 신경절 뉴런 배양

내이의 특수 구조인 나선형 신경절과 코르티 기관을 포함하는 해부된 쥐 내이 분절로 시작합니다.

코르티 기관에는 청각 신호 수용체 역할을 하는 유모 세포가 포함되어 있습니다.

나선형 신경절은 코르티 기관의 유모 세포를 자극하는 과정을 확장하는 뉴런 세포체로 구성됩니다.

나선형 신경절을 코르티 기관에서 분리하고 작은 조직 절편 또는 외식편을 얻습니다.

이제 배양 배지를 포함하는 세포외 매트릭스 코팅 다중 전극 어레이를 가져 오십시오.

외식편을 어레이에 놓고 Corti 기관을 전극 영역 외부에 배치합니다. 인큐베이트.

외식체는 코팅된 다중 전극 표면에 부착됩니다.

혈청 단백질과 성장 인자가 함유된 배지를 정기적으로 첨가하십시오.

배양하는 동안 배지 구성 요소와 Corti 기관은 신경 영양 지원을 제공하여 다중 전극 위의 나선형 신경절 뉴런에서 신경돌기 성장을 촉진합니다.

나선형 신경절의 기저 부분과 Corti 기관을 집게로 잡고 Corti 기관을 기저부에서 정점까지 천천히 풀어 modiolus의 나선형 신경절에서 Corti 기관을 분리합니다. 그런 다음 겸자나 미세한 미세해부 가위 또는 칼을 사용하여 나선형 신경절에서 측면 외식편을 자릅니다.

이제 나선형 신경절 외식편과 코르티 기관을 MEA로 옮깁니다. 그런 다음 전극 영역에서 약 5mm 떨어진 전극 영역과 Corti 기관 위에 SG 외식편을 배치합니다. 조직 손상을 피하면서 외식편과 Corti 기관을 MEA에 배치합니다. 그런 다음 MEA를 인큐베이터에 조심스럽게 넣고 섭씨 37도 및 5%_CO2에서 배양합니다.

다음날 외식편이 MEA에 부착되어 있는지 육안으로 검사합니다. 그런 다음 연속 5일 동안 매일 10% FBS 및 BDNF를 함유한 배양 배지 100마이크로리터를 추가합니다. 6일째에 10% FBS 및 10밀리리터당 BDNF 5나노그램을 함유한 배양 배지 2밀리리터를 추가하고 추가로 13일 동안 조직을 배양합니다.