0 조회수 • 2:12 분 • July 8th, 2025
유전적으로 변형된 성상세포를 포함하는 멀티웰 플레이트로 시작합니다. 이 세포는 성상세포 배지에 배치된 커버슬립에 부착됩니다.
이러한 유전자 변형 세포는 뉴런으로 강제로 전환하는 형질전환 인자를 발현합니다. 이 과정을 뉴런 재프로그래밍이라고 합니다.
특정 분자와 B27 보충제를 포함하는 신경 분화 배지를 섭취하십시오. 이러한 구성 요소는 함께 필수 영양소와 차별화 요소를 제공합니다.
성상세포 배지를 신경 분화 배지로 교체하십시오.
필요한 기간 동안 성상세포를 배양합니다.
배양하는 동안 성상세포에 의해 발현되는 형질전환 인자는 성상세포를 뉴런으로 전환할 수 있는 일련의 분자 사건을 유발합니다.
변환된 뉴런은 일반적인 뉴런과 유사하게 더 작은 세포체와 길쭉한 돌기를 가지고 있습니다.
49밀리리터의 염기성 배양 배지에 1밀리리터 B27 보충제를 첨가하여 신경 분화 배지를 준비합니다. 24 내지 48시간 후, 세포가 형질도입되었는지 형질감염되었는지 여부에 따라, 성상세포 배지를 웰당 1밀리리터 뉴런 분화 배지로 교체한다. 세포를 섭씨 37도에서 9% 이산화탄소로 배양합니다.
재프로그래밍 효율을 높이려면 성상세포 배지를 분화 배지로 교체할 때 포스콜린과 도르소모르핀으로 신경 분화 배지를 각각 30마이크로몰 및 1마이크로몰의 최종 농도로 보충합니다. Forskolin과 Dorsomorphin으로 세포를 처리하기로 선택한 경우 초기 치료 2일 후에 Dorsomorphin의 두 번째 용량을 제공합니다. 이 두 번째 처리를 배양 배지에 직접 첨가하십시오.