청각 뉴런을 시각화하기 위한 쐐기 뇌 슬라이스 준비하기

마우스 뇌로 시작하여 소리 처리에 중요한 청각 뉴런을 보존하기 위해 뒤쪽 부분 아래로 수평으로 해부합니다.

후방 부분을 마그네틱 디스크에 장착합니다. 슬라이싱하는 동안 조직을 안정화하기 위해 한천 블록을 배치합니다.

절편을 블레이드가 장착된 진동극의 슬라이싱 챔버 단계로 옮깁니다.

산소를 공급하고 뉴런 무결성을 보존하는 콜드 완충제와 기포 카보겐 가스를 도입합니다.

뇌 부분의 윗부분을 제거하기 위해 수평으로 고르게 자릅니다.

그런 다음 스테이지를 기울이고 청각 신경근이 보일 때까지 나머지 부분을 계속 자릅니다.

스테이지를 재정렬합니다. 그런 다음 회전하고 슬라이스의 얇은 가장자리의 원하는 두께에 맞게 블레이드 위치를 조정합니다.

블레이드를 멀리 옮기고 스테이지를 이전 위치로 다시 정렬합니다. 이제 뇌를 쐐기 모양으로 자르고 한쪽은 두껍고 다른 쪽은 얇습니다.

두꺼운 면에는 청각 신경근이 포함되고, 얇은 면에는 상호 연결된 청각 뉴런이 있습니다.

면도날을 사용하여 코에서 목 뒤쪽까지 두개골 정중선의 피부를 자르는 것부터 시작합니다. 피부를 벗겨 두개골을 노출시키고, 두개골 기저부에서 시작하여 코 쪽으로 작은 가위를 사용하여 정중선을 통해 두개골을 절개합니다.

람다 봉합사에서 정중선에서 양쪽 귀를 향해 측면으로 두개골을 절개하여 두개골을 벗겨 뇌를 노출시킵니다. 끝에서 시작하여 작은 실험실 주걱을 사용하여 두개골에서 뇌를 부드럽게 들어 올려 시신경을 절단합니다.

계속해서 뇌를 부드럽게 뒤로 움직여 복부 표면을 노출시키고 미세한 집게를 사용하여 뇌간 복부 표면 근처의 삼차 신경을 조심스럽게 꼬집어 절단합니다. 차가운 슬라이싱 용액으로 채워진 유리 페트리 접시에 준비물을 넣고 접시를 해부 현미경으로 놓습니다. 전정 두구 신경을 노출시키기 위해 뇌간 가까이의 안면 신경을 다듬습니다.

가는 집게를 사용하여 전정 두껍이 두개골을 빠져나가는 구멍으로 끝을 최대한 밀어 넣습니다. 꼬집어 양쪽 신경을 절단하고 신경근을 뇌간에 붙인 상태로 둡니다.

사다리꼴 몸체 근처의 뇌간 복부 표면에서 수막과 맥관 구조를 제거합니다. 그런 다음 남은 뇌 신경과 결합 조직을 꼬집어 뇌를 두개골에서 완전히 해방시키고 가능하면 남은 척수를 보존하도록 주의하십시오.

스테이지에 고정할 수 있도록 뇌 표면을 준비하려면 뇌 복부면을 위로 향하게 하고 무딘 도구를 사용하여 척수를 부드럽게 고정시켜 뇌 조직을 안정시킵니다. 뇌를 통해 접시 바닥까지 약 20도 각도로 열린 집게를 삽입하여 끝이 시신경 교차로 뇌의 꼬리 쪽 뒷쪽 표면을 빠져나가도록 하고 면도날을 사용하여 집게를 따라 자릅니다.

다음으로 4% 한천의 1입방센티미터 블록을 준비하고 작은 접착제 한 방울을 스테이지의 직사각형에 펴 바릅니다. 집게를 사용하여 뇌를 조심스럽게 들어 올리고 종이 타월 가장자리로 여분의 액체를 부드럽게 두드려줍니다. 그런 다음 슬라이스하는 동안 복부 표면이 칼날 방향을 향하도록 막힌 표면을 접착제 위에 놓고 한천 블록을 지지대로 등쪽 표면에 부드럽게 밀어 넣습니다.

두꺼운 쪽에 달팽이관 신경근이 있고 얇은 쪽에 내측, 올리보달팽이관 뉴런, 사다리꼴체의 내측 핵이 있는 쐐기 슬라이스를 얻으려면 뇌가 부착된 자기 디스크를 스테이지 홀더 위에 놓고 홀더를 뇌의 복부 표면이 블레이드를 향하도록 진동 절개기의 슬라이싱 챔버에 놓습니다. 챔버에 얼음처럼 차가운 슬라이싱 용액을 채우고 블레이드를 카보겐 기포 용액으로 내립니다.

슬라이스가 대칭인지 확인하기 위해 관심 영역의 꼬리 쪽으로 슬라이스를 자릅니다. 그런 다음 스테이지를 한쪽으로 약 15도 이동합니다. 청각 신경근이 한쪽 표면에 가까워지고 슬라이스의 다른 쪽 표면에서 안면 신경이 보일 때까지 조심스럽게 계속 자릅니다.

스테이지를 15도 이동하여 원래 위치로 되돌리고 블레이드를 티슈에서 멀리 이동합니다. 얇은 면의 측면 가장자리가 블레이드를 향하도록 스테이지 베이스를 90도 회전하고 블레이드를 수백 미크론 내린 후 블레이드를 조직 가장자리에 천천히 가깝게 가져옵니다. 칼날을 약간 집어넣은 상태에서 칼날을 슬라이스의 얇은 가장자리의 원하는 두께로 내립니다.

블레이드를 조직에서 뒤로 옮기고 복부 표면이 s를 향하도록 s를 돌립니다.tage 베이스. 쐐기 슬라이스의 표면을 지정하기 위해 절단하고 슬라이스를 1제곱센티미터의 인터페이스 용지에 옮깁니다. 꼬리 표면이 아래로.

안면 신경은 표면의 슬라이스 양쪽 반구에서 보여야 합니다. 그런 다음 슬라이스를 섭씨 35도의 배양 챔버로 이동하여 30분 동안 회수합니다.