JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 3:06 분 • July 8th, 2025
배양 접시의 적절한 배지에 신경 세포를 첨가하는 것으로 시작합니다.
형광 염료로 태그가 지정된 자기 코어를 포함하는 형광 자성 나노입자(MNP)를 추가합니다.
배양하는 동안 세포는 엔도사이토시스를 통해 MNP를 흡수하고 자화됩니다.
깨끗한 자화 패턴 기판을 배양 접시에 놓습니다. 이 유리 기판에는 자기 특성을 지닌 기하학적 패턴이 내장되어 있습니다.
기판을 자외선에 노출시켜 살균합니다.
기질을 콜라겐으로 코팅하여 세포 부착을 촉진합니다.
MNP 로드 셀을 기질에 추가하고 배양합니다.
기판의 외부 자기장은 MNP 로드 셀을 끌어당겨 부착을 가능하게 합니다.
특정 성장 인자를 포함하는 배지를 일정한 간격으로 추가합니다.
성장 인자는 세포가 확장을 형성하는 데 도움을 주는 반면, 기질의 자기 패턴은 이러한 확장의 방향을 지시합니다.
코팅되지 않은 일반 35mm 접시에 100만 개의 세포를 시드합니다. 원하는 MNP 농도를 얻기 위해 계산된 부피의 MNP 현탁액 및 분화 배지를 접시에 추가합니다. 세포, MNP 및 분화 배지를 혼합한 다음 접시를 섭씨 37도의 5% 이산화탄소 가습 인큐베이터에서 24시간 동안 배양합니다.
패턴이 있는 기질을 70% 에탄올로 세척하고 후드의 35mm 배양 접시에 넣습니다. 패턴이 있는 기판 아래에 큰 자석을 1분 동안 놓은 다음 접시를 위로 움직여 제거하고 후드에서 자석을 꺼냅니다. 자외선을 15분 동안 켭니다.
콜라겐 코팅 유리 기판을 준비하려면 콜라겐 I형을 30% 에탄올에 1:50 비율로 희석합니다. 용액으로 유리를 덮으십시오. 모든 용액이 증발할 때까지 접시를 후드에 덮지 않은 채 4시간 동안 그대로 두십시오. 그런 다음 멸균 PBS에서 세 번 세척합니다. 인큐베이터에서 세포를 제거합니다. 세포 현탁액을 200g에서 5분 동안 원심분리하고 상청액을 버립니다. 세포를 1밀리리터의 신선한 분화 배지에 재현탁하고 혈구계를 사용하여 세포를 계산합니다.
35mm 배양 접시에 기질 위에 105개의 세포를 시드하고 2 밀리리터의 분화 배지를 첨가합니다. 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소 가습 인큐베이터에서 배양액을 배양합니다. 24시간 후, 1-100개의 신선한 쥐 베타-NGF를 세포에 첨가합니다. 분화 배지를 갱신하고 이틀마다 신선한 베타-NGF를 추가합니다.