0 조회수 • 1:56 분 • July 8th, 2025
세포외 폴리머와 접착 단백질을 포함하는 기저막 매트릭스로 코팅된 멀티웰 플레이트로 시작합니다.
Rho-키나아제 억제제를 함유한 성장 배지에 인간 배아 줄기 세포의 단일 세포 현탁액으로 웰을 시드합니다.
줄기 세포가 매트릭스에 부착될 수 있도록 배양합니다.
세포는 Rho-kinase 효소를 차단하고 세포사멸 세포 사멸을 방지하는 억제제를 흡수합니다.
이는 세포의 생존을 촉진하고 미분화 상태로 유지합니다.
성장 배지를 성장 인자가 풍부하고 특정 ALK 수용체를 표적으로 하는 억제제를 포함하는 신경 유도 배지로 교체합니다.
이러한 억제제는 수용체와 상호 작용하고 BMP 및 TGF-β 신호 전달 경로를 차단하여 세포가 내배엽 또는 중배엽 전구체로 분화하는 것을 방지합니다.
이것은 줄기 세포를 외배엽 전구체로 선택적으로 분화시킵니다.
이러한 외배엽 전구체는 배지의 영양분과 성장 인자를 활용하여 증식하고 나중에 신경 전구 세포로 분화합니다.
10마이크로몰 ROCK 억제제가 있는 2밀리리터의 mTeSR1에 웰당 2 x 10 5세포의 밀도로 기저막 매트릭스를 코팅한 6웰 플레이트에 세포를 플레이트합니다. 24시간 후, 배양 배지를 1마이크로몰 도소모르핀과 5마이크로몰 SB431542가 보충된 신경 유도 배지로 교체합니다. 신경 유도의 처음 4일 동안 격일로 배지를 교체한 다음 7일째에 합류에 도달할 때까지 매일 배지를 교체합니다.