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신경과학
0 조회수 • 3:50 분 • July 8th, 2025
슬라이싱 용액에 담근 인간의 뇌 조직을 가져 가십시오. 용액의 생물학적 pH와 영양소는 조직 기능을 유지하는 데 도움이 됩니다.
가장 바깥쪽 수막층을 제거하고 조직을 다듬어 평평한 표면을 만듭니다.
조직에서 과도한 용액을 닦아냅니다. 잘라낸 조직을 아가로스 블록으로 표본 디스크에 부착하고 절편을 용이하게 하기 위해 조직이 블록과 접촉하도록 유지합니다.
디스크를 진동 절단기 완충 트레이에 넣고 얼음처럼 차가운 슬라이싱 용액으로 조직을 덮습니다.
비브라톰을 사용하여 조직 구조를 보존하는 균일한 슬라이스를 생성합니다.
과도한 조직을 잘라내어 회백질과 백질의 비율을 일정하게 유지합니다.
슬라이스를 배양 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트에 넣고 배양합니다.
조각은 영양분의 균일한 접근을 보장하기 위해 배지에 부유된 상태로 유지되며, 이는 자유 부유 슬라이스 배양으로 알려진 기술입니다.
조직 생존력을 유지하기 위해 신경 성장 인자 보충 배지로 배양물을 정기적으로 보충합니다.
표본을 슬라이싱 용액이 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다. 미세한 수술 도구를 사용하여 남은 수막을 최대한 조심스럽게 제거합니다. 실험 설계의 특정 특성을 가진 슬라이스를 생산하기 위한 최상의 시편 방향을 선택하고 24번 메스 칼날을 사용하여 시편 디스크에 접착할 베이스가 되도록 평평한 표면을 다듬습니다.
일회용 플라스틱 숟가락과 섬세한 페인트 브러시를 사용하여 페트리 접시에서 조각을 모으고 여분의 용액을 여과지로 말립니다. 다음으로, 슈퍼 글루를 사용하여 조직이 접시에 단단히 부착되고 아가로스 블록과 접촉할 때까지 조직을 비브라톰 표본 접시에 부착합니다.
비브라톰 표본 디스크를 비브라톰 버퍼 트레이에 넣습니다. 면도날을 단단히 고정한 상태에서 칼 홀더를 제자리에 잠급니다. 슬라이싱 용액을 추가하고 시편과 블레이드를 모두 덮고 있는지 확인합니다. 그런 다음 표본을 200마이크로미터 조각으로 자르기 시작합니다.
슬라이스를 완충 트레이에서 슬라이싱 용액이 들어 있는 페트리 접시로 옮기고 느슨한 가장자리와 과도한 백질을 약 70% 피질 및 30% 백질의 비율로 다듬습니다. 층류 캐비닛에서 24웰 플레이트의 각 웰에 600마이크로리터의 배양 배지를 추가하고 슬라이스를 도금하기 전에 섭씨 36도에서 5% 이산화탄소와 함께 최소 20분 동안 배양합니다. 그런 다음 붓을 사용하여 각 웰에 한 조각을 접시합니다.
접시에 사용하지 않은 우물이 있으면 400마이크로리터의 멸균수를 채웁니다. 섭씨 36도에서 이산화탄소 5%와 함께 배양합니다. 미리 준비된 배양 배지 10밀리리터에 밀리리터당 50나노그램 농도의 뇌 유래 신경영양 인자를 보충합니다.
8 내지 16시간 후, 각 웰에서 333마이크로리터의 컨디셔닝된 배지를 제거하고 133마이크로리터의 신선한 BDNF 보충 배지를 추가합니다. 컨디셔닝된 배지의 1/3을 24시간마다 신선한 BDNF 보충 배지로 교체합니다.