NMDG 기반 보호 회복 방법을 사용한 뇌 절편 준비

0 조회수3:59 • July 8th, 2025

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립된 뇌부터 시작하세요. 대사 과정을 일시 중지하기 위해 미리 냉각된 인공 뇌척수액 또는 aCSF에 뇌를 빠르게 담그십시오

.

aCSF에는 신경 세포 손상과 사망을 감소시키는 큰 유기 양이온인 NMDG가 포함되어 있습니다.

aCSF에는 pH와 염분 농도를 유지하고 세포 부종과 손상을 방지하는 HEPES도 포함되어 있습니다.

여과지가 들어 있는 페트리 접시에 뇌를 옮깁니다.

원하는 영역을 얻기 위해 뇌를 다듬습니다.

적절한 접착제를 사용하여 검체 홀더에 뇌 블록을 고정하고 아가로스에 삽입합니다.

시편 홀더를 슬라이서에 배치합니다.

슬라이서의 저장소에 미리 냉각된 aCSF를 채우고 용액에 공기를 공급하여 최적의 산소 공급을 보장합니다.

뇌 블록의 섹션을 얻습니다.

절편을 예열된 aCSF로 옮겨 대사 과정을 다시 시작하여 절편이 회복될 수 있도록 합니다.

온전한 뇌를 미리 식힌 NMDG-HEPES aCSF의 비커에 부드럽게 퍼내고 약 1분 동안 뇌를 균일하게 식힙니다. 이제 큰 주걱을 사용하여 비커에서 여과지로 덮인 페트리 접시로 뇌를 옮깁니다.

선호하는 슬라이싱 각도와 원하는 뇌 관심 영역에 따라 뇌를 다듬고 장착합니다. 취급 중 장기간의 산소 결핍을 방지하기 위해 신속하게 작업하십시오. 그런 다음 접착 접착제를 사용하여 브레인 블록을 표본 홀더에 부착합니다.

표본 홀더의 내부 부분을 집어넣어 브레인 블록을 완전히 내부로 빼냅니다. 그런 다음 뇌 블록이 아가로스로 완전히 덮일 때까지 용융된 아가로스를 홀더에 직접 붓습니다. 그런 다음 아가로스가 응고될 때까지 10초 동안 예식된 액세서리 냉각 블록을 시편 홀더 주위에 고정합니다.

시편 홀더를 슬라이서 기계의 콘센트에 삽입하고 올바른 정렬을 확인합니다. 그런 다음 250밀리리터 비커에서 남은 미리 냉각되고 산소가 공급된 NMDG-HEPES aCSF로 저장소를 채우고 적절한 산소 공급을 보장하기 위해 슬라이싱 기간 동안 버블 스톤을 저장소에 넣습니다.

다음으로, 마이크로미터를 조정하여 아가로스 포매 뇌 표본을 전진시키기 시작합니다. 슬라이서를 시작하고 경험적으로 고급 속도와 진동 주파수를 원하는 수준으로 조정합니다. 관심 있는 뇌 영역이 완전히 절편될 때까지 300마이크로미터 단위로 조직을 계속 전진시키고 슬라이스합니다. 슬라이싱 절차의 총 시간은 15분 미만이어야 합니다.

초기 NMDG 회수를 위해 절편 절차가 완료되면 절단된 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 모든 슬라이스를 수집하고 150밀리리터의 NMDG-HEPES aCSF로 채워진 섭씨 34도 회수 챔버로 옮깁니다.

급성 뇌 절편 회복 단계의 타이밍은 형태학적 보존과 각 뉴런의 전기생리학적 특성의 기능적 회복 사이의 균형을 맞추는 데 매우 중요합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026