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신경과학
0 조회수 • 3:30 분 • July 8th, 2025
인공 뇌척수액(aCSF)에 온전한 쥐의 눈을 채취하고 절개하여 망막이 포함된 안컵을 분리합니다.
효소 용액으로 처리하여 내부 제한막을 제거하고 신경 세포를 노출시킵니다.
소화를 멈추기 위해 억제 용액에 조직을 담그고 과도한 용액을 제거하기 위해 세척합니다.
조직을 저온의 특수 인큐베이터에 넣어 세포 대사를 늦추고 조직을 보존합니다.
이 인큐베이터는 조직을 장착하기 위한 메쉬가있는 메인 챔버로 구성됩니다. 챔버는 aCSF로 채워져 있으며 온도와 pH는 조직 기능을 보존하기 위해 제어됩니다.
미생물 오염을 제거하기 위해 aCSF를 다른 챔버로 펌핑하고 자외선으로 처리하여 미생물을 죽입니다.
멸균된 aCSF는 메인 챔버로 다시 펌핑됩니다.
망막을 분리하려면 안컵을 제거하고 망막을 주변 조직에서 분리한 다음 인큐베이터로 되돌립니다.
망막 전체 마운트 준비의 경우 안락사된 동물의 눈을 즉시 적출하십시오. ora serrata를 따라 작은 절단을 하고 실온에서 카보겐 공급이 있는 Ames Media 또는 aCSF에 눈을 놓습니다. 그 후 즉시 작은 가위로 오라 세라타를 따라 잘라 각막, 수정체 및 유리체를 제거하고 집게로 제거합니다. 조직을 실온의 배양 시스템에 넣습니다.
내부 제한막을 제거하려면 망막이 들어 있는 안컵을 파파인, L-시스테인, EDTA 및 DNAse가 들어 있는 작은 유리병에 섭씨 37도에서 20분 동안 옮깁니다. 뚜껑을 통해 용액에 카보겐을 바르되 거품이 생기지 않도록 하십시오. Earl's BSS에서 10분 동안 조직을 난소 및 BSA 용액에 넣어 효소 소화를 중지합니다. 그런 다음 aCSF로 조직을 철저히 씻으십시오.
그런 다음 조직을 배양 시스템으로 옮기고 온도를 섭씨 약 15-16도로 낮춥니다. 그런 다음 망막 조직을 현미경으로 옮깁니다. 아이컵에서 망막을 분리하고 면도날로 네 조각으로 자릅니다. 망막 전체가 필요한 경우 망막 주변에 작은 자개를 4개 만들어 평평하게 눕힐 수 있도록 합니다.
이 조직은 이제 전기생리학을 위해 현미경으로 옮기거나 브레인큐베이터에서 유지할 수 있습니다. 조직은 pH 및 온도 측정을위한 프로브를 포함하는 주 챔버에서 유지됩니다. 두 번째 챔버는 메인 챔버에서 분리되어 용액에 떠 있는 박테리아를 조사하기 위해 1.1 와트 UVC 광선에 노출됩니다. 연동 펌프를 사용하여 두 개의 챔버를 통해 aCSF를 순환시키고 Peltier 열전 냉각판을 사용하여 메인 챔버를 냉각하거나 가열합니다.