교차 의사소통을 위한 치아 치수 세포와 삼차 신경 세포의 공동 배양 확립

마우스 치수 조직에서 얻은 중간엽 줄기 세포가 풍부한 현탁액으로 시작합니다.

세포 접착 및 증식을 허용하여 단층을 형성하기 위해 배양합니다.

라미닌으로 코팅된 다공성 멤브레인 인서트를 치수 세포가 들어 있는 웰에 넣습니다.

마우스 뇌에서 유래한 삼차 신경을 포함하는 공동 배양 배지로 삽입물을 시드합니다. 뉴런 부착을 허용하기 위해 배양합니다.

배지를 우리딘 및 5-플루오로-2 데옥시우리딘과 같은 성장 조절제가 포함된 공동 배양 배지로 교체합니다.

이 분자는 세포에 들어가 DNA 합성을 억제하여 활발하게 증식하는 중간엽 줄기세포의 성장을 제어합니다.

시간이 지남에 따라 중간엽 세포는 다공성 막을 통과하여 삼차 신경을 자극하는 작은 신호 분자를 분비합니다.

이 자극으로 인해 삼차 신경의 신경 과정이 중간엽 세포 쪽으로 늘어납니다. 또한 뉴런은 신호 분자를 분비하여 교차 의사소통을 가능하게 합니다.

쥐를 안락사시킨 후 입이 천장을 향하고 목 밑부분이 작업대에 평평해지도록 일회용 언더패드에 머리를 놓습니다. 면도날을 톱질하는 동작으로 사용하여 하악골과 상악골을 분리합니다. 어금니에 더 쉽게 접근할 수 있도록 가위나 집게로 혀를 제거합니다.

열린 머리를 멸균 거즈 패드 위의 접시에 넣고 표본을 해부 현미경 아래에 놓습니다. 제1대구치를 둘러싼 치조골 조직을 제거합니다. 치조 개구부에 집게를 삽입하고 치아에서 입의 협측 또는 설측 쪽으로 조직을 떼어냅니다.

모든 상악 제1대구치를 수집하고 턱밑 및 상악 제1대구치를 얼음 위에 1X PBS가 있는 별도의 세포 배양 접시로 부드럽게 옮깁니다. 각 상악 제1대구치의 바깥쪽을 둘러싸고 있는 법랑질 외부 기관을 제거합니다. 집게 세트를 사용하여 어금니를 회전시켜 교두가 아래로 내려가고 열린 치근이 노출되도록 합니다. 치아 바닥에는 타원형 구멍이 있고 상아질과 법랑질의 얇은 층으로 둘러싸인 불투명한 치수 조직이 있습니다.

집게의 끝을 사용하여 광물화된 조직의 내부 둘레 주위에 집게의 한쪽 팔을 움직여 치수를 부드럽게 풉니다. 광물화된 구조에서 치수 조직을 제거하고 1X PBS가 들어 있는 세 번째 접시로 옮깁니다. 법랑질 외부 기관이 아직 분리되지 않은 경우 제거하십시오.

모든 치수 조직을 50밀리리터 원추형 튜브에서 0.25% 트립신 EDTA로 옮깁니다. 혼합물을 소용돌이치고 섭씨 37도의 따뜻한 수조에 10분 동안 넣습니다. 멸균 후드 아래에서 효소를 비활성화하기 위해 트립신에