Organotypic Slice 공동 배양 모델에서 뇌종양 확립

아가로스 포매 마우스 뇌 절편으로 시작합니다.

배양 배지가 들어 있는 멤브레인 삽입물에 뇌 절편을 놓습니다.

영양소에 균일하게 노출되도록 슬라이스를 담그십시오.

인서트에서 소량의 배지를 수집하여 웰 바닥으로 옮깁니다.

인서트에서 여분의 배지를 제거합니다.

인서트를 배양 배지가 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다.

후속 상호 작용에 접근할 수 있도록 슬라이스에서 아가로스 가장자리를 조심스럽게 제거합니다.

배양 배지가 들어 있는 새 웰에 삽입물을 넣고 슬라이스 회수를 용이하게 하기 위해 배양합니다.

인간 뇌종양 세포를 슬라이스에 추가하고 배양합니다.

종양 세포는 슬라이스 내의 뇌 세포 및 미세 환경과 상호 작용하여 증식을 시작하고 3D 공동 배양 모델을 확립합니다.

슬롯 형 스푼을 사용하여 브레인 슬라이스를 인서트의 미디어에 넣고 슬라이스가 완전히 잠기도록 부드럽게 누릅니다. 모든 슬라이스에 대해 절차를 반복합니다. 다음으로, 삽입물 상단에서 슬라이스 배양 배지 1밀리리터를 꺼내 웰 바닥에 분배합니다.

뇌 조각 주변의 아가로스 가장자리가 보일 때까지 여분의 배지를 제거하고 폐기하고 나머지 조각에 대해 이렇게 합니다. 그런 다음 집게로 테두리를 잡고 기울여 여분의 매체를 제거합니다.

삽입물을 1밀리리터의 슬라이스 배양 배지가 들어 있는 35mm 접시에 빠르게 옮깁니다. 슬라이스가 늘어나거나 손상되거나 막에 구멍이 뚫리지 않도록 주의하면서 조직 주변의 아가로스를 제거합니다. 그런 다음 인서트를 다시 6웰 플레이트로 옮기고 나머지 슬라이스에 대해 반복합니다.

송풍기가 꺼진 조직 배양 후드에서 각 멤브레인에서 아가로스 조각을 제거합니다. 그런 다음 슬라이스를 이전에 준비한 6웰 플레이트에 옮기고 섭씨 37도에서 24-48시간 동안 보관합니다. 이 절차에서 인서트를 송풍기를 끈 상태에서 조직 배양 후드에 있는 신선한 슬라이스 배지가 들어 있는 새로운 6웰 플레이트로 옮깁니다. 그런 다음 종양 세포를 65마이크로리터의 배지에 슬라이스 중앙에 분배합니다. 일주일 동안 배양에서 뇌 절편을 섭씨 37도로 유지하고 매일 배지를 교체합니다.