다중 전극 어레이를 사용한 척수 절편 사이의 기능적 연결 재생 연구

다중 전극 어레이(MEA)를 입체 현미경 아래 페트리 접시에 놓습니다. MEA는 두 개의 개별 영역이 있는 그리드에 배열된 전극으로 구성됩니다.

MEA에 혈장 한 방울을 추가합니다. 쥐 배아에서 얻은 두 개의 척수 절편을 복부면이 서로 마주보도록 배치합니다.

트롬빈 용액을 도입하고 혈장과 혼합한 후 배양합니다. 트롬빈은 혈장 응고를 일으켜 MEA에 슬라이스의 접착을 촉진하는 생물학적 스캐폴드를 생성합니다.

영양 배지를 첨가하고 교반하면서 배양하여 슬라이스 사이의 세포 연결 형성을 촉진하고 융합을 유발합니다.

입체 현미경 아래에서 슬라이스 사이의 조직 연결을 절단하여 병변을 도입합니다. 영양 배지를 넣고 배양합니다.

배양하는 동안 뉴런은 병변을 가로질러 성장하여 슬라이스를 연결합니다.

기록 챔버를 사용하여 양쪽 척수 절편의 전기적 활동을 기록하여 재생된 기능적 연결을 평가합니다.

내부에 코팅된 미세 전극 어레이가 있는 페트리 접시를 입체 현미경 아래에 넣습니다. 어레이에 초점을 맞추고 6마이크로리터의 닭 플라즈마 방울을 전극 어레이의 중앙에 놓습니다. 작은 주걱을 사용하여 복부면이 서로 마주보도록 두 개의 척수 절편을 혈장 방울에 조심스럽게 밀어 넣습니다.

다음으로, 닭 혈장 방울 주위에 8마이크로리터의 트롬빈을 추가합니다. 그런 다음 피펫 팁을 사용하여 닭 혈장과 트롬빈 혼합물을 조심스럽게 혼합하고 펴 바릅니다. 닭고기 혈장과 트롬빈 혼합물이 너무 끈적해져서 응고되기 시작하기 직전에 여분의 액체를 흡인하십시오. 그런 다음 페트리 접시에 뚜껑을 덮고 가습실에 넣습니다. 챔버를 섭씨 37도의 인큐베이터 안에 약 한 시간 동안 두십시오.

배양 후 샘플에 10마이크로리터의 영양 배지를 조심스럽게 첨가합니다. 페트리 접시에 뚜껑을 덮고 인큐베이터에 다시 45분 동안 넣습니다. 다음으로, 각 다중 전극 어레이 배양 어셈블리를 롤러 튜브에 넣고 3밀리리터의 영양 배지를 추가합니다. 뚜껑을 단단히 닫고 롤러 튜브를 롤러 드럼에 넣습니다. 인큐베이터에서 1-2RPM으로 드럼을 섭씨 37도에서

회전시킵니다.

멸균 고무 끝 겸자를 사용하여 롤러 튜브에서 다중 전극 어레이 배양 어셈블리를 제거하고 입체 현미경 아래에서 페트리 접시에 넣습니다. 조직에 초점을 맞추고 두 조각이 융합되었는지 확인합니다.

그런 다음 어셈블리를 안정적으로 잡고 조직 조각에 가까운 다중 전극 어레이의 홈에 메스 칼날을 놓습니다. 메스를 다소 수평으로 잡은 다