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신경과학
0 조회수 • 5:42 분 • July 8th, 2025
쥐의 뇌에서 유래한 신경교세포의 부착 배양이 있는 마이크로플레이트를 가져 와십시오. 배양에는 성상세포, 미세아교세포 및 희소돌기아교세포가 포함되어 있습니다.
배지를 제거하고 효소 용액과 함께 배양하여 세포를 분리한 다음 튜브로 옮깁니다.
원심분리하여 세포 파편이 있는 상청액을 제거합니다. 세포를 따뜻한 배지에 재현탁합니다.
주사기를 사용하여 분쇄하여 세포 덩어리를 분해하고 스트레이너를 사용하여 여과하여 단일 세포 현탁액을 얻습니다.
광가교성 생체고분자, 가교제 및 세포외 기질 성분을 추가합니다.
커버슬립에 부착된 틀에 혼합물을 붓습니다. 혼합물을 고강도 빛에 노출시켜 가교를 유도하고 겔을 형성하고 신경교세포를 캡슐
화합니다.금형을 제거하고 커버슬립을 마이크로플레이트에 놓습니다. 따뜻한 배지를 추가하고 생리학적 조건에서 겔을 배양합니다.
세포는 지지 세포외 기질 내에서 증식하고 세포 네트워크를 생성하여 신경교세포의 3차원 배양을 확립합니다.
세포 캡슐화 24시간 전에, 2주간의 1차 배양에서 배지를 흡인하고 각 웰에 1밀리리터의 신선한 배지를 추가합니다. 세포 캡슐화 당일, 각 12웰 플레이트에 대해 12.5ml의 묽은 트립신과 25ml의 배지를 준비하고 수조에서 섭씨 37도까지 데웁니다. 그런 다음 10밀리리터 혈청학적 피펫을 사용하여 12웰 플레이트의 각 웰에 약 1밀리리터의 희석된 트립신을 추가합니다.
합류 세포층이 플레이트에서 분리될 때까지 섭씨 37도 및 5% 이산화탄소에서 20-30분 동안 배양합니다. 배양 후 1밀리리터 피펫을 사용하여 분리된 세포를 회수하고 단일 부유 조각으로 나타나야 하며 15밀리리터 원추형 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 동등한 부피의 배지로 희석하고 실온에서 2분 동안 200배 g으로 원심분리합니다.
원심분리 후, 상청액을 버리고 세포 펠릿을 10밀리리터의 따뜻한 배지에 재현탁합니다. 피펫으로 세포를 5회 분쇄한 다음 200회 g에서 2분 동안 다시 원심분리합니다. 스핀 후, 상청액을 디캔팅하고 세포를 5밀리리터의 따뜻한 배지에 재현탁한 다음 세포를 50밀리리터 원추형 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
그런 다음 18게이지 바늘이 달린 10밀리리터 주사기를 사용하여 세포 용액을 세 번 분쇄하고 40미크론 세포 체를 통해 현탁액을 새로운 원추형 원심분리기 튜브로 여과합니다. 다음으로, 10마이크로리터의 세포 현탁액을 수집하고 따뜻한 배지에서 1-100으로 희석하고 자동 세포 계수기로 세포
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