인간 만능 줄기 세포를 이용한 천체권 생성 및 유지

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Rho-키나아제 억제제를 함유한 성장 배지에서 ECM 코팅 플레이트와 인간 만능 줄기 세포의 종자 클러스터로 시작합니다.

ECM은 세포 부착을 강화하는 반면, 억제제는 Rho-키나아제를 차단하여 세포사멸 세포 사멸을 방지하고 세포 생존 및 증식을 촉진합니다.

줄기세포를 신경전구세포로 분화하도록 유도하기 위해 신경분화 배지를 도입합니다.

분리 용액으로 처리하십시오. 이 용액의 효소는 ECM과 세포 접촉을 분해하여 세포를 방출합니다.

Rho-키나아제 억제제가 들어 있는 코팅되지 않은 플라스크에 옮깁니다.

억제제는 세포 생존과 3차원 구조 또는 스페로이드로의 자발적인 응집을 촉진합니다.

성장 인자가 풍부한 신경 분화 배지로 스페로이드를 보충하여 신경 전구 세포가 성상세포 전구세포로 분화하고 천성구를 형성할 수 있도록 합니다.

정기적으로 분리 용액을 추가하여 천체권을 더 작은 클러스터로 분리합니다. 이를 통해 영양분이 스페로이드의 내부 세포에 도달하고 생존력을 유지할 수 있습니다.

천상구를 신선한 매질로 유지하여 조상세포가 성상세포로 성숙할 수 있도록 합니다.

Rho-키나아제 억제제 Y-27632를 함유하는 hPSC 배지 2밀리리터에 hPSC 클러스터를 ECM 코팅 6웰 플레이트의 각 웰에 파종하는 것으로 시작합니다. 줄기 세포가 약 50% 합류할 때까지 유지합니다. 그런 다음 배지를 SP-431542 및 DMH1을 포함하는 신경 배지로 변경하여 신경 유도를 촉진합니다.

세포가 약 95% 합류하면 각 웰을 1-6으로 새로운 ECM 코팅 웰로 분할합니다. 14일째에 세포를 분리 용액으로 해리시키고, 응집체의 형성을 촉진하기 위해 Y-27632를 함유한 배지가 있는 코팅되지 않은 T-25 플라스크로 각 웰의 내용물을 옮깁니다.

자발적으로 형성된 3D 응집체에서 성상세포 전구세포와 성상세포를 생성하려면 EGF와 FGF2를 포함하는 신경 배지로 전환하고 4-6개월에 성상세포 동일성이 확인될 때까지 3-4일마다 먹이를 줍니다.

기본적으로 이 프로토콜은 등쪽 피질 성상세포를 생성합니다. 그러나 성상세포 아형은 원하는 경우 패턴화 형태겐을 추가하여 국소적으로 지정할 수 있습니다.

일주일에 한 번 어두운 중심이 나타나면 원심분리로 구체를 수집한 다음 H-astro 응집체를 분리 용액으로 부드럽게 해리시킵니다. 비중추신경 및 비신경 세포의 계대를 피하기 위해 자발적으로 부착되지 않는 구체만 재도금하십시오.

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Last updated: 18 July 2026