JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:16 분 • July 8th, 2025
세포외 기질(ECM)으로 코팅된 멀티웰 플레이트를 가져 와십시오.
별도의 웰에 비형질전환 및 형질전환 인간만능줄기세포(hPSC)를 배양 배지에 도입합니다.
형질전환 hPSC는 항생제 유도 프로모터 하에서 형질전환유전자를 운반합니다. 이식유전자는 신경 분화를 유도하는 전사 인자를 암호화합니다.
ECM에 대한 세포 접착을 촉진하기 위해 배양합니다. 배지의 소분자는 세포사멸을 방지하여 세포 증식을 촉진합니다.
세포를 해리시키기 위해 분리 용액을 첨가하고, 해리를 중지하기 위해 배지를 첨가한 다음 세포 증식을 허용하기 위해 다른 ECM 코팅 마이크로플레이트로 옮깁니다.
비형질전환 세포에 소분자를 포함하는 신경 분화 배지를 도입하고 유도제 항생제를 형질전환 세포에 도입합니다.
소분자는 비형질전환 세포가 신경 전구 세포 또는 NPC로 분화하도록 유도합니다. 형질전환 세포에서 전사 인자의 항생제 유도 발현은 NPC로의 분화에 필요한 유전자를 활성화합니다.
다운스트림 애플리케이션을 위해 NPC를 배양에 유지합니다.
비형질전환 신경 전구 세포 및 뉴런 또는 h뉴런의 생성에 대해서는 14일째 hPSC 유래 신경 전구세포를 2밀리리터의 신경 배지 및 웰당 Y27632가 있는 ECM 코팅 6웰 플레이트로 만듭니다.
독시사이클린 유도성 i뉴런으로 작업하는 경우 세포가 약 35% 합류할 때 독시사이클린을 포함하는 신경 배지를 추가하여 분화를 유도하고 유전자 발현을 활성화합니다. 이틀 후, 형질전환 및 비형질전환 계통에 웰당 하루 2밀리리터의 신경 배지를 공급합니다. 세포가 70% 컨플루션에서 들어 올릴 준비가 될 때까지 계속합니다.