시냅스 형성을 유도하기 위해 성상세포와 뉴런의 3D 공동 배양 구체 생성

웰의 표면 장력을 줄이기 위해 계면활성제로 코팅된 멀티웰 플레이트를 가져 가십시오.

적절한 배양 배지에 성상세포와 뉴런의 원하는 비율을 첨가합니다.

원심분리하여 세포를 침전시킨 다음 배양합니다.

낮은 표면 장력은 세포가 우물 표면에 달라붙어 응집을 일으키는 것을 방지합니다.

세포는 접착 분자를 포함한 다양한 막 상호 작용을 통해 서로 부착되어 3D 공배양 구를 형성합니다.

구체를 모아 튜브로 옮깁니다.

구체가 가라앉도록 하십시오. 상청액을 제거하고 신선한 배양 배지를 추가합니다.

구체를 적절한 성장 배지가 들어 있는 스피너 플라스크로 옮기고 일정한 회전으로 배양합니다.

구에서 뉴런은 서로를 향해 돌출부를 확장하여 시냅스라고 하는 접합부를 형성하는 반면, 성상세포는 시냅스를 향해 확장되어 뉴런과 긴밀한 연관성을 확립합니다.

마이크로

플레이트의 각 웰에 총 부피 2밀리리터의 해리된 hAstros 및 hNeurons 또는 iNeuron의 원하는 비율을 추가합니다. 플레이트를 100배 g에서 3분 동안 원심분리한 후 인큐베이터에 다시 넣어 2일 동안 합니다.

하루 후, 조밀하게 채워진 마이크로스피어가 플레이트에 형성되어야 합니다. 1,000마이크로리터 마이크로피펫을 사용하여 마이크로웰에서 구체를 부드럽게 제거합니다. 매체로 마이크로웰의 바닥에 가볍게 힘을 가하여 추가로 부착된 구체를 제거합니다.

15밀리리터 원뿔형 튜브에 모든 구를 모은 후 가라앉히십시오. 그런 다음 먼저 오래된 배지를 흡인한 다음 최소 2밀리리터의 신선한 배지를 추가하여 구체를 세척합니다. 50-60밀리리터의 배지가 들어 있는 스피너 플라스크에 구체를 추가합니다. 플라스크를 인큐베이터에 60RPM으로 설정된 마그네틱 교반판에 놓습니다. 시냅스 형성을 위해서는 최소 3주의 배양이 필요합니다.