0 조회수 • 3:58 분 • July 8th, 2025
골수 간질 세포의 부착 배양으로 시작합니다.
필요한 기간 동안 감소된 산소 수준을 특징으로 하는 상태인 저산소증에 세포를 노출시킵니다.
저산소증 전처리된 세포를 분리한 다음 원심분리하여 상청액을 제거합니다. 신경 성장 인자를 포함하는 신경 전구 배지에 세포를 재현
탁합니다.세포를 저부착 배양 플레이트로 옮기고 배양합니다.
저산소증 전처리 및 신경 성장 인자는 간질 세포를 신경 전구 세포로 분화하도록 유도합니다.
부착이 적은 플레이트 표면은 전구세포를 현탁액으로 유지하여 3차원 신경구로의 증식 및 응집을 촉진합니다.
신경구를 수확하고 원심분리하여 상청액을 제거합니다. 아교세포 특이적 성장 인자를 포함하는 신경교 유도 배지에 세포를 재현탁합니다.
신경구를 세포외 기질 성분인 라미닌과 양전하를 띤 합성 고분자인 폴리-D-라이신으로 코팅된 배양 플레이트로 옮깁니다.
코팅된 표면은 세포 접착을 촉진하여 신경구 부착을 촉진합니다.
신경교세포 특이적 성장 인자는 신경 전구세포를 슈완 세포의 특징적인 테이퍼형 형태를 나타내는 슈완 세포 유사 세포로의 분화를 자극합니다.
저산소 전처리의 경우 먼저 링 클램프를 풀고 노출된 부분을 70% 에탄올로 청소합니다. 또한 저산소증 챔버를 구성 요소로 분해하고 층류 후드에 넣어 자외선 아래에서 15분 동안 멸균합니다.
다음으로, 방금 시연한 대로 80% 내지 90% 합류 MSC 배양액을 10밀리리터의 PBS로 세척하고, 25밀리몰 HEPES가 보충된 신선한 MSC 성장 배지로 배양물을 처리한다. 처리된 배양액을 재조립된 저산소증 챔버에 넣고 링 클램프를 조입니다. 가스 누출이 없는지 확인하기 위해 챔버의 연결 끝을 밀봉하고 99% 질소와 1% 산소의 가스 혼합물을 분당 10리터의 유속으로 챔버로 세척합니다.
5분 후, 챔버를 세포 배양 인큐베이터에 16시간 동안 넣습니다. 다음날 아침, 방금 시연한 대로 세포를 분리하고 원심분리로 수집합니다. 펠릿을 신경 전구 배지에 재현탁하고 섭씨 37도 및 5% CO2에서 12일 동안 배양하기 위해 평방 센티미터당 6 x 103 세포를 저부착 6웰 플레이트에 시드합니다.
상당한비부착 세포 구는 6일에서 7일까지 관찰되어야 하며, 10일에서 12일까지 정상산소증 상태의 신경구보다 저산소증 조절 배양에서 더 많은 신경구가 명백하게 나타나야 합니다. 12일째에 10밀리리터 피펫을 사용하여 신경구를 15밀리리터 원추형 튜브로 옮기고 원심분리로 신경구를 수집합니다.
DMEM/F12에 구체를 재현탁하고 웰당 1.5밀리리터의 신경교 유도 배지에 폴리-D-라이신 라미닌 코팅 6웰 플레이트에 평방 센티미터당 5-10개의 신경구를 플레이트합니다. 최소 7일 동안 구형 세포 배양을 유지하고 3일마다 배지를 새로 고칩니다.
본 연구에서는 저산소 조건 하에서 골수 기질 세포가 신경 전구 세포 및 슈반 세포 유사 세포로 분화하는 과정을 조사합니다. 방법론으로는 저산소 전처리를 시행한 후, 세포 성장과 분화를 촉진하기 위해 특정 배지에서 배양하는 과정이 포함됩니다.
본 방법은 골수 기질 세포로부터 슈반 세포 유사 세포를 생성할 수 있게 하여, 말초 신경계 질환 모델링 및 재생 의학 응용을 위한 확장 가능한 세포원을 제공합니다. 저산소 전처리는 분화 효율을 높여 신경병성 통증 및 신경 손상 모델에서의 표적 검증을 지원합니다. 이 접근 방식은 전임상 스크리닝 및 바이오마커 발굴을 위한 질환 관련 글리아 세포를 생성함으로써 기전적 리스크 감소를 지원합니다.
이 방법은 접근 가능한 중간엽 기질 세포를 글리아 계통 세포로 전환하여 후속 타겟 및 표현형 스크리닝에 활용함으로써 초기 발굴 워크플로우에 통합됩니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026