DRG 뉴런의 분리 및 Schwann 세포 전구체와의 공동 배양을 통해 Schwann 세포 생성

뉴런과 신경교세포를 포함하는 후근 신경절(DRG)이 부착된 쥐 배아의 척수를 취합니다.

코드에서 개별 DRG를 분리하여 튜브로 옮기고 원심분리하여 조직 파편을 버립니다.

효소를 첨가하여 DRG 뉴런과 신경교세포를 해리시킵니다.

셀을 회전시키고 파편을 제거합니다. 뉴런 유지 배지를 첨가하고 분쇄하여 단일 세포 현탁액을 생성합니다.

현탁액을 배양 기질로 코팅된 마이크로플레이트로 옮겨 세포 부착을 촉진합니다.

정제 배지를 도입하고 배양합니다. 배지의 억제제는 분열하지 않는 뉴런이 생존하는 동안 분열하는 신경교세포를 제거합니다.

Schwann 세포 유사 세포 또는 SCLC(SCLC)를 공동 배양 배지에 넣으십시오. Schwann 세포의 전구체인 SCLC는 배아 말초 신경 뉴런과 상호 작용합니다.

현탁액을 DRG 뉴런에 도입하고 배양합니다. SCLC와 DRG 뉴런의 상호 작용은 Schwann 세포로의 성숙을 촉진합니다.

생성된 Schwann 세포는 분석 준비가 완료되었습니다.

후근 신경절을 채취하려면 첫 번째 배아를 엎드린 자세로 해부 현미경으로 실온 PBS가 들어 있는 10cm 배양 접시에 옮기고 척수의 양쪽을 따라 미세 해부 겸자를 삽입합니다.

무딘 해부를 사용하여 집게를 사용하여 목 개구부와 꼬리 그루터기를 따라 척수를 절제하여 주변 연조직에서 척수를 분리합니다. 척수, 신경근 및 부착된 후근 신경절만 남을 때까지 해제된 척수에서 잔여 연조직을 제거합니다.

연결 신경근에서 개별 등근 신경절을 분리합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫 팁이 장착된 피펫 펜을 사용하여 최대 100개의 후근 신경절을 PBS의 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

원심분리로 신경절을 수집하고 튜브당 200마이크로리터의 재조합 효소 세포 해리 시약에 펠릿을 재현탁합니다. 섭씨 37도에서 10분 후, 200마이크로리터 피펫 팁을 사용하여 후근 신경절을 다시 원심분리하여 후근 신경절 후 뉴런 유지 배지에서 펠릿을 부드럽게 분쇄합니다.

후

근 신경절 세포를 평방 센티미터당 5 x 10³ 세포로 폴리-D-라이신 라미닌 코팅된 6웰 플레이트에 웰당 1.5밀리리터의 후근 신경절 뉴런 유지 배지에 시드합니다.

섭씨 37도 및 5%_CO2에서 배양한 후 2일 후, 세포를 세척하고 신경 세포 배양물을 신선한 후근 신경절 뉴런 정제 배지의 인큐베이터로 2일 더 돌립니다.

3-4 유지 및 정제 주기 후, 후근 신경절 세포 배양은 신경 세포 마커 Tuj-1