Hanging Drop 방법에 의한 마우스 배아 줄기 세포로부터 신경 전구 생성

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신경과학

0 조회수 • 3:09 분 • July 8th, 2025

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마우스 배아 줄기 세포 현탁액을 섭취하십시오.

원심분리하고 상청액을 제거한 다음 세포를 신경 분화 배지에 재현탁합니다.

배양판 뚜껑의 안쪽에 현탁액의 물방울을 놓습니다.

물방울이 건조되는 것을 방지하기 위해 바닥판에 완충액을 추가합니다. 바닥판에 뚜껑을 놓고 매달린 방울 배양액을 형성하고 배양합니다.

중력으로 인해 세포는 뭉쳐서 배아체 또는 EB라고 하는 3차원 응집체를 형성합니다.

액적을 분화 배지가 들어 있는 플레이트에 넣고 EB의 성장을 위해 교반하면서 배양합니다.

원심분리하고 배지를 제거하고, 레티노산이 보충된 분화 배지에 EB를 재현탁하고, 배양 플레이트로 옮기고, 배양한다.

레티노산은 세포에 들어가 전사 복합체의 형성을 유발합니다. 이 복합체는 유전자 발현을 유도하여 신경 전구 세포로의 분화를 촉발합니다.

차별화된 EB는 다운스트림 애플리케이션에 사용할 수 있습니다.

행잉 드롭 셀 배양을 설정하는 것부터 시작합니다. 10cm 세포 배양 플레이트의 경우 분화 배지 20마이크로리터당 농도를 500개 세포로 조정합니다. 50 개의 20마이크로리터 물방울에 충분한 세포 현탁액을 준비합니다. 마이크로피펫 또는 중계기 피펫을 사용하여 20마이크로리터의 세포 현탁액 방울을 조직 배양 플레이트 뚜껑에 놓고 액적이 너무 가까워져 합쳐지지 않도록 합니다.

접시에 5-10밀리리터의 PBS를 채우고 조심스럽게 뚜껑을 접시에 다시 놓습니다. 섭씨 37도 인큐베이터에서 배양합니다. 이틀 후, 뚜껑에서 물방울을 모아 10밀리리터의 분화 배지로 채워진 10센티미터 세포 배양 현탁판에 넣습니다. 그런 다음 인큐베이터에서 저속으로 설정된 오비탈 셰이커에 플레이트를 놓습니다. 또 다른 이틀 후, 세포를 200배g에서 3분 동안 원심분리하고 상청액을 제거합니다.

배아체 분화를 신경 전구 세포로 유도하려면 5마이크로몰 레티노산이 있는 분화 배지에 세포를 재현탁합니다. 플레이트를 이틀 동안 배양합니다. 그런 다음 플레이트를 기울이고 피펫팅하여 배지의 최소 절반을 신선한 배지로 교체합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026