신경 줄기세포에서 siRNA 매개 유전자 침묵

유전자 침묵에 관여하는 RNA의 일종인 작은 간섭 RNA 또는 siRNA를 예로 들어 보겠습니다.

리포좀이라고 하는 구형 지질 소포를 추가합니다.

리포좀은 siRNA를 캡슐화하여 분해로부터 보호합니다.

신경줄기세포가 포함된 배양 웰에 siRNA-리포좀 복합체를 첨가합니다. 대조군으로 하나를 잘 보관하고 배양하십시오.

리포좀은 세포막과 융합하여 siRNA를 방출합니다.

siRNA는 RNA 유도 침묵 복합체(RISC)에 결합하여 한 가닥이 제거됩니다.

나머지 가닥은 세포 분화를 담당하는 mRNA를 표적으로 삼아 분해를 유발합니다.

웰에 적절한 분화 배지를 추가합니다.

대조군 우물에서 배지의 성장 인자 및 기타 영양소는 신경 줄기 세포가 조골세포로 분화하는 것을 촉진합니다.

적절한 염색 기술을 사용하여 세포에 조골세포 특이적 마커를 염색하고 핵을 파란색 형광 염료로 염색합니다.

유전자 침묵 세포에 조골세포 특이적 마커가 없다는 것은 분화할 수 없음을 나타냅니다.

O9-1 세포에서 siRNA 녹다운을 수행하려면 세포를 회수하고 시딩합니다. 적절한 양의 무혈청 배지로 리포솜을 희석합니다. 그런 다음 텍스트 프로토콜에 따라 무혈청 배지에서 siRNA를 희석합니다. 그런 다음 제조업체의 지침에 따라 희석된 siRNA를 희석된 리포좀에 첨가합니다. 피펫팅으로 용액을 혼합하고 실온에서 5분 동안 배양합니다.

다음으로, 세포에 적절한 양의 siRNA-지질 복합체를 추가합니다. 그런 다음 표준 세포 배양 인큐베이터에서 24시간 동안 세포를 배양합니다. O9-1 세포는 특정 분화 배양 조건에서 다른 세포 유형으로 분화할 수 있습니다. O9-1 세포를 조골세포로 분화시키려면 텍스트 프로토콜에 따라 골형성 분화 배지를 준비합니다. 마지막으로, 면역염색을 통해 분화된 조골세포에서 조골세포 마커인 오스테오칼신을 검출합니다.