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신경과학
0 조회수 • 2:38 분 • July 8th, 2025
라미닌 코팅된 멀티웰 플레이트에서 성인 인간 섬유아세포에서 유래한 유도된 신경 전구 세포 콜로니의 부착 배양으로 시작합니다.
콜로니를 완충액으로 세척하여 비부착 세포를 제거한 다음 새로운 완충액을 추가합니다.
개별 콜로니 주위를 긁어서 주변 세포를 제거합니다.
콜로니를 신경유도 배지를 포함하는 신선한 라미닌 코팅 웰로 옮깁니다.
콜로니를 기계적으로 분해하여 단일 세포 현탁액을 얻습니다.
세포외 기질 단백질인 라미닌은 전구세포의 표면 단백질과 상호 작용하여 웰 표면에 대한 세포 접착을 촉진합니다.
세포에 들어가 특정 단백질 키나아제를 차단하여 세포 사멸을 방지하는 소분자 억제제를 추가합니다.
신경유도 배지에 존재하는 성장 인자와 소분자는 전구세포의 증식을 촉진합니다.
주기적으로 배지를 교체하여 영양분을 보충하여 지속적인 조구세포 증식을 촉진합니다.
합류 배양 또는 완전히 덮인 세포층은 유도된 신경 전구 세포의 성공적인 확장을 나타냅니다.
하루 후, 플레이트에서 라미닌을 흡인하고 200마이크로리터의 신경 유도 배지를 웰에 추가합니다. 6웰 플레이트의 웰당 2밀리리터의 신경 유도 배지를 추가하기 전에 피킹할 콜로니가 포함된 6웰 플레이트를 DPBS로 한 번 세척합니다.
얇은 바늘을 사용하여 콜로니 주위를 긁어 주변 세포를 제거하고 50마이크로리터에 설정된 200마이크로리터 피펫맨에 장착된 피펫 팁을 사용하여 콜로니를 기계적으로 선택합니다.
각 콜로니를 라미닌 코팅된 48웰 플레이트의 한 웰로 옮기고 위아래로 10회 피펫팅하여 기계적으로 단일 세포 현탁액을 생성합니다. 최종 농도 10마이크로몰의 Rho-kinase 억제제를 세포에 첨가합니다. 섭씨 37도, 5% CO2에서 48웰 플레이트에서 세포를 이틀 동안 성장시킵니다. 세포가 80%에서 90%의 합류에 도달할 때까지 이틀에 한 번씩 배지를 교체합니다.