유도 신경전구세포(Induced Neural Progenitor Cells)를 성상세포(astrocyte)로 분화(Differentiating Induced Neural Progenitor Cells into Astrocyte)

유도

된 신경 전구 세포(iNPC)를 세포외 기질 단백질로 코팅된 멀티웰 플레이트에서 배양합니다.

배지를 신경교 유도 배지로 교체하고 배양합니다. 배지의 성장 인자와 호르몬은 iNPC가 신경교 전구체 세포로 분화하는 것을 촉진합니다.

세포 증식을 위해 격일로 배지를 교체하십시오. 그런 다음 배지를 성상세포 배지로 교체하고 배양합니다.

배지의 특정 영양소와 성장 인자는 신경교 전구체 세포를 성상세포로 분화시킵니다.

격일로 매체 변화는 성상세포 성숙을 촉진합니다.

세포가 약 70% 합류할 때 배지를 neuro-diff-medium으로 변경하고 3주 동안 격일로 배지를 계속 교체합니다. 분화 중에 세포를 분리하지 마십시오. 3주 후 세포는 신경 마커 TuJ1을 발현해야 합니다.

더 성숙한 뉴런과 뉴런 아형을 얻으려면 최대 3개월까지 분화를 계속하십시오. 신경교 계통에 대한 iNPC의 구체적 분화를 위해, 교세포 전구체 세포로의 분화를 유도하기 위해 표피 성장 인자 밀리리터당 20나노그램을 포함하는 배지를 신경교 유도 배지로 변경하십시오. 배지의 절반을 제거하고 약 2주 동안 격일로 신선한 배지로 교체합니다.

이 기간 동안 세포는 100% 합류에 도달하면 10마이크로몰 Rho-kinase 억제제의 존재 하에서 1-3으로 분할되어야 합니다. 2주 후, 세포가 거의 합류할 때 배지를 상업적으로 이용 가능한 성상세포 배지로 변경하고 이틀에 한 번씩 배지를 계속 교체하여 세포를 성상세포로 더 분화시킵니다. 약 7일 후, 세포는 성상세포 마커를 발현하기 시작합니다.