인간 신경모세포종 세포주를 성숙한 뉴런으로 분화

고혈청 농도 배지에서 뉴런 유사 및 상피 유사 세포를 포함하는 미분화 신경모세포종 세포주로 시작합니다.

배지를 제거하고 레티노산이 보충된 감소된 혈청 농도를 포함하는 분화 배지를 추가합니다.

혈청 결핍은 상피 유사 세포 증식을 방지합니다.

레티노산은 뉴런 유사 세포에서 뉴런 유전자 발현을 유도하여 이를 보다 분화된 표현형으로 변형시킵니다.

트립신-EDTA 칵테일을 첨가하여 부분적으로 분화된 세포를 분리합니다.

트립신을 차단하기 위해 혈청 단백질이 포함된 배지를 추가합니다.

세포를 플레이트화하고 레티노산을 함유하고 혈청 수준을 더 낮춘 새로운 분화 배지를 도입합니다.

세포는 계속해서 확장된 과정을 발전시킵니다.

트립신을 첨가하여 세포를 분리합니다.

다음으로, 트립신을 차단하는 배지를 추가하고 세포외 기질 단백질 코팅 접시에 세포를 도금하여 세포 접착을 촉진합니다.

마지막으로 신경 성장 인자를 함유한 무혈청 배지를 보충하십시오.

이러한 요인은 광범위한 분지 신경염 과정을 나타내는 성숙한 뉴런으로의 말단 분화를 유도합니다.

0일째에 혈구계를 사용하여 세포 수를 계산합니다. 그런 다음 염기성 성장 배지를 사용하여 세포 현탁액을 밀리리터당 50,000 세포로 희석합니다. 35mm 접시당 2밀리리터의 세포를 도금하여 접시당 총 100,000개의 세포를 도금합니다. 그런 다음 세포를 섭씨 37도의 인큐베이터에 넣습니다.

첫째 날, 가열되고 평형화된 배지에 RA를 추가합니다. 오래된 미디어를 부드럽게 흡인하고 버립니다. 다음으로, RA가 포함된 분화 배지 1번 2밀리리터를 각 35mm 접시에 넣고 인큐베이터로 되돌립니다.

7일째에는 오래된 매체를 부드럽게 흡인하고 버립니다. 각 35mm 접시에 200마이크로리터의 따뜻한 트립신-EDTA를 추가합니다. 그런 다음 세포를 인큐베이터에 2-3분 동안 또는 현미경으로 관찰한 바와 같이 플레이트에서 눈에 띄게 들어 올려질 때까지 넣습니다.

각 35mm 접시에 RA가 포함된 분화 배지 1번 2밀리리터를 첨가하여 트립신을 담금질하고 배지를 사용하여 플레이트의 나머지 신경 세포를 헹굽니다. 그런 다음 전체 부피를 50밀리리터 원뿔형 튜브로 옮깁니다.

10밀리리터 플라스틱 피펫으로 5회 이상 사용하지 말고 천천히 위아래로 부드럽게 분쇄합니다. 그 후, 세포 현탁액 2밀리리터를 신선한 35mm 접시에 분취한 후 인큐베이터로 되돌립니다.

10일째에 매체를 부드럽게 흡인하여 버립니다. 각 35mm