감각신경절(Sensory Ganglia)로부터 세포의 격리(Isolation of Cells from Sensory Ganglia)

미리 세척된 감각 신경절을 튜브에 넣으십시오.

소화 효소의 혼합물을 포함하는 해리 용액을 첨가하고 배양합니다.

이 효소는 세포외 기질을 분해하여 개별 세포를 방출합니다.

배양 후 해리 용액을 제거합니다.

인산염 완충액으로 신경절을 세척하고 새로운 해리 용액을 첨가합니다.

신경절을 위아래로 피펫팅하여 세포를 해리시킵니다.

현탁액을 세포 스트레이너에 통과시켜 덩어리를 제거합니다.

스트레이너 바닥에서 남은 세포를 모아 튜브에 넣습니다.

밀도 구배 튜브와 원심분리기 위에 세포 현탁액을 적층

화합니다.

모양과 질량의 차이에 따라 세포는 하층으로 이동하고 세포 파편은 상층에 남아 있습니다.

상위 레이어를 버립니다.

남은 세포 현탁액에 신선한 배지를 첨가하고 원심분리합니다.

상청액을 버리고 추가 사용을 위해 감각 신경절 세포를 보관합니다.

감각 신경절을 채취한 후 신경절을 방해하지 않고 각 튜브에서 500마이크로리터의 신경절 해리 용액을 흡인합니다. 그런 다음 각 샘플에 PBS 1밀리리터를 추가하고 신경절이 튜브 바닥에 가라앉을 때까지 기다립니다.

그런 다음 PBS를 제거하고 소화 효소가 보충된 신경절 해리 용액 1밀리리터를 뉴런에 추가합니다. 소화 효소의 나이에 따라 적절한 시간 동안 튜브를 섭씨 37도에서 배양하고 15분마다 튜브를 짧게 흔들고 흔들어 신경절이 소화 용액으로 덮이도록 합니다.

신경 세포가 소화되는 동안 샘플당 1.5밀리리터 튜브 1개에 400마이크로리터의 28% 밀도 용액에 걸쳐 새로 준비된 12% 밀도 용액 400마이크로리터를 천천히 조심스럽게 첨가합니다. 두 개의 별개의 레이어가 표시되어야 하며 하나는 다른 레이어보다 어둡습니다.

소화 기간이 끝나면 소화 효소를 버리고 방금 시연한 대로 PBS 1밀리리터로 신경절을 두 번 세척합니다. 두 번째 세척 후 각 튜브에 200마이크로리터의 신선한 신경절 해리 용액을 추가합니다.

그런 다음 100마이크로리터 부피로 설정된 200마이크로리터 피펫을 사용하여 신경절을 위아래로 여러 번 피펫팅하여 기포를 피하도록 주의하면서 세포를 단일 세포 현탁액으로 해리시킵니다. 온전한 조직 조각이 보이지 않으면 한 손으로 70미크론 세포 여과기를 단단히 잡고 해리된 세포 용액을 여과기 중앙에 피펫팅합니다. 그런 다음 100마이크로리터의 신선한 신경절 해리 용액으로 해리 튜브를 세척하여 추가 세포를 수집합니다.

스트레이너를 통해 세척액을 걸러내고 새 피펫 팁을 사용하여 스트레이너