빠른 신경관 확장 및 형성 시작기능적 신경 세포 연결

라이신으로 코팅된 접시 내에 마이크로채널을 포함하는 미세유체 장치를 조립하는 것부터 시작하십시오.

성장 배지가 있는 배아 뉴런을 미세유체 우물에 시드하여 마이크로채널을 통해 흐를 수 있도록 합니다.

배양하여 신경 부착 및 성장을 촉진하여 물리적으로 고립된 신경 집단을 형성합니다.

설정을 분해하고 세포 생존력을 유지하기 위해 식염수 흐름이 있는 미세 조작기 챔버에 접시를 놓습니다.

뉴런 근처에 라이신 코팅 비드를 도입하여 신경돌기 또는 세포 돌기가 부착되어 비드-신경돌기 복합체를 형성할 수 있도록 합니다.

마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 흡입을 가하여 한 채널에서 비드-신경돌기 복합체를 결합합니다.

이 복합체를 당겨 기계적 장력을 유도하여 빠른 신경돌기 확장을 유도합니다.

이것을 다른 비드-뉴런 복합체로 안내하고 두 번째 마이크로 매니퓰레이터로 잡습니다.

신경염 연결의 형성을 촉진하기 위해 두 구슬을 제자리에 유지하십시오.

흡입을 해제하고 식염수를 배양 배지로 교체하십시오.

인큐베이팅하여 뉴런 간의 기능적 연결을 설정하고 신경 전달 물질을 통한 의사소통을 촉진합니다.

우물을 비우지 않고 미세유체 장치의 상부 웰에서 배지를 제거합니다. 그런 다음 20마이크로리터의 농축 세포 용액을 미세유체 장치의 오른쪽 상단 웰에 넣고 세포가 단일 집단 미세유체 장치 내부에서 어떻게 흐르는지 현미경으로 확인합니다.

여러 집단의 장치에 세포를 플레이트하려면 농축된 세포 용액 20마이크로리터를 각 상단 웰에 추가합니다. 현미경으로 세포가 챔버 내부에 있는지 확인하십시오. 그런 다음 기질에 대한 세포 부착을 촉진하기 위해 장치를 인큐베이터에 15-30분 동안 넣습니다.

세포가 기질에 부착된 후 단일 집단 장치의 두 상단 웰에 40마이크로리터의 NBM을 추가합니다. 이렇게 하면 마이크로채널에서 기포를 제거하는 데 도움이 됩니다. 세포가 주입된 동일한 웰인 다중 집단 장치의 상단 웰에 20마이크로리터의 NBM을 추가합니다. 매체는 양의 메니스커스를 형성하기 위해 약간 돌출되어야 하며 우물에 머핀 상단 측면을 부여

해야 합니다.

미세유체 장치를 제거하기 1-2일 전에 각 샘플 접시에 예열된 NBM 2밀리리터를 추가하고 챔버를 가득 채웁니다. 그런 다음 장치를 인큐베이터에 보관하십시오. 그런 다음 멸균 핀셋과 피펫 팁을 사용하여 커버슬립에서 미세유체 장치를 제거하고 패턴화된 뉴런 구성을 남깁니다.

이 절차에서, 준비된 PDL 코팅 비드의 40-