0 조회수 • 4:13 분 • July 8th, 2025
신경교세포에서 유래한 원발성 뇌종양인 인간 교모세포종 조직을 예로 들어 보겠습니다.
얼음처럼 차가운 처리 매체를 사용하여 조직을 세척하여 잔여 혈액을 제거합니다.
조직을 조각으로 자르고 용융된 아가로스가 들어 있는 포매 몰드에 삽입합니다.
금형을 식혀 아가로스가 중합되어 안정적인 겔 매트릭스를 형성하도록 합니다.
금형에서 조직 블록을 제거하고 진동 절개술의 표본 플레이트에 고정합니다.
얼음처럼 차가운 처리 매체를 추가하여 블록을 담그십시오. 산소가 함유된 가스 혼합물을 통과시켜 배지에 공기를 공급하고 조직 생존력을 유지합니다.
내장된 종양 조직을 얇은 조각으로 절편합니다.
조직 구조를 보존하기 위해 얼음처럼 차가운 처리 배지가 들어 있는 페트리 접시에 슬라이스를 옮깁니다.
그런 다음 슬라이스 배양 유지 배지를 포함하는 웰의 투과성 멤브레인 인서트에 조직 슬라이스를 플레이트합니다.
생리적 조건에서 슬라이스를 유지하십시오. 슬라이스 배양은 다운스트림 분석을 위한 준비가 되었습니다.
멸균 겸자를 사용하여 빈 PTFE 배양 인서트를 웰당 1밀리리터의 슬라이스 배양 유지 배지가 들어 있는 6웰 플레이트의 각 웰에 넣는 것으로 시작합니다. 모든 인서트가 추가되면 플레이트를 섭씨 37도 및 5% CO2의 가습된 워터 재킷 조직 배양 인큐베이터에 넣습니다.
다음으로, 얼음처럼 차가운 처리 배지가 들어 있는 페트리 접시에 종양 조직 조각을 넣고 피펫을 사용하여 신선한 배지로 조직을 부드럽게 세 번 세척하여 부착된 적혈구를 제거합니다. 세 번째 세척 후 메스를 사용하여 종양 조각을 약 3 x 3 x 10mm 스트립으로 자르고 부착된 혈관을 조심스럽게 제거하고 괴사 또는 소작 조직을 피합니다.
모든 조직이 잘리면 섭씨 37도의 액체 아가로스 5-7밀리리터를 2센티미터 플라스틱 포매 몰드에 넣고 얼음 층에서 아가로스를 1분 동안 식힙니다. 2-4개의 조직 스트립을 아가로스에 넣고 장축이 수직으로 향하도록 하고 배치 후 2-5분 동안 조직을 얼음 위에 둡니다.
아가로스가 응고되면 메스로 형태의 측면을 잘라 금형에서 아가로스를 부드럽게 제거하고 시아노아크릴레이트 접착제를 넉넉하게 방울하여 아가로스 블록을 비브라톰 표본 플레이트에 고정합니다.
접착제가 굳으면 아가로스 블록을 얼음처럼 차가운 처리 매체에 담그고 다듬어진 멸균 플라스틱 피펫을 사용하여 5% CO2 95% O2 혼합물을 진동 저장소 내의 배지에 거품을 냅니다. 비브라톰 슬라이스 두께를 300-350미크론으로 설정하고 조직 일관성 및 비브라톰 사양에 따라 블레이드 고급 속도와 블레이드 진폭을 조정합니다.
계획된 실험 분석에 따라 적절한 수의 슬라이스를 얻습니다. 스테인리스 스틸 마이크로 주걱을 사용하여 슬라이스를 획득할 때 얼음처럼 차가운 가공 매체가 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다. 모든 슬라이스가 획득되면 마이크로 주걱을 사용하여 각 슬라이스를 단일 PTFE 인서트로 옮깁니다.
12 내지 24시간 배양 후, 세포 배양 인큐베이터에서 신선한 슬라이스 배양 유지 배지가 들어 있는 새로운 6웰 플레이트를 15분 동안 평형화합니다. 그런 다음 멸균 겸자를 사용하여 각 인서트의 가장자리를 잡고 인서트를 새로운 6웰 플레이트의 개별 웰로 옮깁니다.