인간 혈액-뇌 장벽의 삼중 세포 배양 모델 개발

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신경과학

0 조회수 • 3:44 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

웰 인서트의 밑면에 주위 세포를 추가하는 것으로 시작합니다.

웰 삽입물을 배양 플레이트로 덮고 배양합니다.

주위 세포는 웰 인서트의 막에 부착되어 단일 세포 층 또는 단층을 형성합니다.

다른 배양 접시를 가져 가십시오.

인간 성상세포를 적절한 배지의 우물에 첨가하십시오. 그런 다음 플레이트를 배양합니다.

성상세포는 우물 바닥에 부착되어 단층을 형성합니다.

배지를 버리고 신선한 성상세포와 주위 세포 배지를 추가합니다.

이제 주위 세포층이 있는 웰 인서트가 포함된 배양 플레이트를 가져 오십시오.

플레이트를 뒤집고 웰 인서트를 성상세포 층이 포함된 웰로 옮깁니다.

인간 뇌 내피 세포를 웰 삽입물의 윗면에 추가하고 배양합니다.

내피 세포는 웰 인서트에 부착되어 혈류와 뇌를 분리하는 중요한 인터페이스인 혈액-뇌 장벽과 유사한 삼중 세포 배양 시스템을 형성합니다.

시작하여 섭

씨 37도의 5% 이산화탄소 인큐베이터 내에서 세포 접착을 위해 활성화된 표면이 있는 T75 배양 플라스크에서 합류할 때까지 배양합니다. 합류에 도달하면 오래된 기생충 배지를 흡인하고 5밀리리터의 따뜻한 Dulbecco's PBS로 세포를 세척합니다. Dulbecco의 PBS를 흡인하고 4밀리리터의 따뜻한 트립신-EDTA 용액과 1밀리리터의 Dulbecco's PBS를 조합하여 플라스크에서 세포를 분리합니다.

플라스크를 이산화탄소 인큐베이터에서 섭씨 5도에서 37분 동안 배양합니다. 세포가 플라스크에서 분리되었는지 확인하기 위해 현미경으로 관찰하십시오. 2% FBS를 함유한 따뜻한 기생충 배지 5밀리리터를 플라스크에 넣고 분리된 세포를 50밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 세포 현탁액을 200g에서 3분 동안 원심분리하여 세포가 튜브 바닥에 펠릿을 형성하도록 합니다.

튜브에서 배지를 흡인하여 세포 펠릿이 손상되지 않도록 합니다. 기생충 배지에 세포 펠릿을 재현탁합니다. 세포의 합류점과 필요한 웰 삽입물 수에 따라 배지의 양을 계산합니다. 재현탁된 세포 10마이크로리터를 섭취하십시오. 세포 계수 슬라이드에 놓고 세포 수를 세십시오.

세포 밀도를 결정하고 1밀리리터의 기생충 배지에 인서트당 300,000개의 세포를 웰 인서트의 내강 쪽에 시드합니다. 텍스트 원고에 설명된 대로 2% FBS를 포함하는 성상세포 배지를 사용하여 1차 인간 성상세포를 배양합니다. 세포 밀도를 결정하고 웰당 300,000개의 세포를 조직 배양 6웰 플레이트의 바닥에 시드합니다. 증발을 방지하기 위해 플레이트를 덮고 밤새 배양합니다.

인큐베이터에서 주위 세포가 들어 있는 웰 인서트에서 성상 세포가 들어 있는 조직 배양 6-웰 플레이트를 꺼냅니다. 조직 배양 6-웰 플레이트에서 성상세포 배지를 흡인하고 각 웰에 기생충 배지 1밀리리터와 성상세포 배지 1밀리리터를 추가합니다.

웰 인서트에서 주위 세포 배지를 흡인하고 파종된 성상세포를 포함하는 조직 배양 6-웰 플레이트에 넣습니다. 2밀리리터의 완전한 클래식 배지에 웰당 300,000개의 세포 밀도로 HBMEC를 동일한 웰 인서트의 정점 쪽에 시드합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026