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신경과학
0 조회수 • 4:02 분 • July 8th, 2025
뇌종양 또는 교모세포종에서 파생된 세포 응집체인 신경교종으로 시작합니다.
해리 효소를 첨가하십시오. 교모세포종 세포를 분리하고 단일 세포 현탁액을 얻기 위해 배양합니다.
다음으로, 효소 활성을 멈추기 위해 혈청이 풍부한 배양 배지를 도입합니다.
원심분리하여 상청액을 제거한 다음 세포를 재현탁합니다.
현탁액을 여과한 다음 원심분리하여 상층액을 제거합니다.
작은 펩타이드를 포함하는 하이드로겔 전구체에 세포를 재현탁합니다.
이 혼합물을 히알루론산이 함유된 사전 조립된 실리콘 몰드를 사용하여 우물에 넣습니다.
용액을 섞는다. 히알루론산과 하이드로겔 전구체 사이의 상호 작용을 허용하여 세포 포획을 용이하게 하는 하이드로겔을 형성하도록 배양합니다.
세포 생존을 유지하기 위해 하이드로겔을 배양 배지로 오버레이합니다.
금형을 분해한 후 하이드로겔을 배양합니다.
하이드로겔 내에서 세포의 접착 단백질은 전구체 펩타이드 및 히알루론산과 상호 작용합니다.
이로 인해 세포가 작은 클러스터를 형성하고 3차원 배양이 발생합니다.
시작하려면 깨끗하고 건조한 실리콘 고무 몰드를 조직 배양 처리되지 않은 12웰 플레이트의 각 웰에 넣고 피펫 팁의 깨끗하고 뭉툭한 끝을 사용하여 몰드를 플레이트 바닥에 부착합니다. 금형과 웰 바닥 사이의 밀봉을 확인한 후, 교모세포종 세포 배양액에서 해리된 신경아교종 구체를 원심분리에 의해 수집하고 펠릿을 1밀리리터의 세포 해리 효소에 재현탁합니다.
실온에서 5분 후, 부드럽게 두드려 튜브를 교반하고 4밀리리터의 완전 배지로 효소 반응을 멈춥니다. 세포를 다시 원심분리하고 70마이크로미터 필터를 통해 세포를 걸러내기 전에 1밀리리터의 신선한 완전 배지에 펠릿을 재현탁합니다. 추가 4밀리리터의 완전 배지로 스트레이너를 세척하고 현탁액을 원심분리기 튜브당 8 x 104세포의 2개 분취량으로 나눕니다.
원심분리로 세포를 수집하고 새로 준비된 폴리에틸렌 글리콜 말레이미드 또는 PEG-Mal-RGD 80마이크로리터에 펠릿 1개를 재현탁하고, 금형당 새로 준비된 PEG-Mal-CYS 용액 80마이크로리터에 펠릿 1개를 재현탁합니다. 200마이크로리터의 와이드 오리피스 마이크로피펫 팁을 사용하여 각 고무 실리콘 몰드에 40마이크로리터의 히알루론산 용액을 첨가한 다음 40마이크로리터의 PEG-Mal-CYS 또는 PEG-Mal-RGD 세포 용액을 넣고 금형당 10회 이하로 빠르게 위아래로 피펫팅하여 혼합합니다.
겔화 시간이 빠르기 때문에 두 하이드로겔 성분이 혼합되면 넓은 오리피스 피펫 팁을 사용하여 용액을 빠르고 철저하게 혼합하는 것이 중요합니다. 이 단계에서는 연습이 필요합니다.
그런 다음 겔로 캡슐화된 세포를 섭씨 37도 및 5% CO2 세포 배양 인큐베이터에 5-10분 동안 넣습니다. 배양이 끝나면 각 젤에 2-2.5밀리리터의 배양 배지를 추가하고 멸균된 2마이크로리터 피펫 팁과 집게를 사용하여 금형 측면에서 젤을 부드럽게 분리합니다. 그런 다음 멸균된 겸자를 사용하여 플레이트 웰에서 금형을 제거하고 플레이트를 세포 인큐베이터로 되돌립니다.