Dissociating and Culturing Neurons from Hippocampal Tissue Samples(해마 조직 샘플에서 뉴런 분리와 배양)

0 조회수3:35 • July 8th, 2025

뉴런과 다양한 비뉴런 세포를 포함하는 해마 조직 샘플로 시작합니다.

프로테아제 효소 용액을 첨가합니다. 효소는 조직의 세포외 기질을 분해하여 세포 해리를 시작합니다.

잔류 효소를 제거하기 위해 도금 매체로 세척합니다.

소화된 조직을 반복적으로 피펫팅하여 조직에서 세포를 기계적으로 해리시켜 단일 세포 현탁액을 형성합니다.

심분리하여 상층액을 제거합니다. 세포를 도금 배지에 재현탁합니다.

멀티웰 플레이트의 폴리-D-라이신 코팅 커버슬립에 세포를 시드합니다. 라이신은 세포 부착을 향상시킵니다.

도금 배지를 뉴런 생존에 필수적인 영양소를 함유한 뉴런 유지 배지로 교체하십시오.

아라비노실시토신 또는 Ara-C가 함유된 유지 배지로 배지의 절반을 새로 고칩니다.

Ara-C는 세포에 들어가 비신경 세포의 성장을 선택적으로 억제하여 사멸로 이어집니다.

뉴런 생존을 지원하기 위해 배지를 새로운 유지 배지로 교체하십시오.

배양을 위해 해마 뉴런을 해리하려면 프로테아제 효소 용액을 해동하고 도금 배지를 섭씨 37도로 예열합니다. 다음으로 해부된 해마를 SLDS로 헹굽니다. 그런 다음 제거하고 프로테아제 효소 용액 2밀리리터를 넣고 샘플을 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다.

그 후, 해마 외식편을 5 내지 10 밀리리터의 도금 배지로 두 번 세척하고, 도금 배지 5 밀리리터를 첨가한다. 1밀리리터 플라스틱 팁이 있는 피펫을 사용하여 작은 소용돌이를 생성하여 해마 외식편을 단일 세포로 해리합니다. 용액이 흐려지고 큰 외식편 조각이 남지 않을 때까지 산소 기포가 형성되지 않도록 약 40회 위아래로 피펫팅합니다.

다음으로, 세포를 1,125배 중력으로 3분 동안 원심분리합니다. 배지에 잠긴 세포로 상청액을 제거하고 세포를 145밀리리터의 도금 배지에 재현탁합니다. 그런 다음 웰당 1밀리리터의 세포 현탁액을 24웰 플레이트에 추가합니다. 도금 배지에서 세포를 섭씨 37도에서 2-4시간 동안 배양합니다.

그런 다음 도금 매체를 제거하고 새 유지 관리 매체로 교체하십시오. 이틀 후, 섬유아세포, 내피 및 신경교세포의 성장을 억제하기 위해 배지의 절반을 유지 배지에 용해된 2개의 마이크로몰 Ara-C로 교체합니다. 그런 다음 세포를 Ara-C에 2일 동안 노출시킨 후 배지를 신선한 유지 배지로 교체합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026