0 조회수 • 4:00 분 • July 8th, 2025
인간 배아 줄기 세포를 매트릭스 코팅된 멀티웰 플레이트에 파종하는 것으로 시작합니다.
매트릭스 환경은 특수 세포로의 시기 적절하지 않은 성숙을 방지합니다.
디메틸 설폭사이드 또는 DMSO가 보충된 적절한 유지 배지를 추가합니다.
DMSO 처리는 성숙 신호에 대한 세포의 반응을 향상시킵니다.
다음으로, 배지를 특정 억제제를 함유한 신경 유도 배지로 교체합니다.
억제제는 비신경 세포 발달 신호를 차단하여 줄기 세포가 신경 전구 세포 또는 NPC로 변형되도록 유도합니다.
NPC를 해리시키기 위해 배지를 분리 용액으로 교체합니다. 원하는 수의 세포를 다른 멀티웰 플레이트에 다시 도금합니다.
DMSO가 보충된 세포 특이적 분화 배지를 추가하여 NPC가 희소돌기아교세포 전구체 세포 또는 OPC로의 형질전환을 촉진합니다.
배지를 세포 특이적 성숙 배지로 교체하여 OPC가 희소돌기아교세포로 발달하는 것을 촉진합니다.
신경 전구 세포 생성을 수행하려면 텍스트 원고에 설명된 대로 H1 인간 ES 세포를 배양하고 신경 전구 세포로 전질전환합니다. 음성 1일째, ES 세포 유지 배지에 있는 0.5 내지 100만 개의 세포를 성장 인자 감소 매트릭스 용액으로 코팅한 6웰 플레이트의 각 웰에 시드합니다.
0일째에 2% DMSO가 보충된 ES 세포 유지 배지로 24시간 동안 세포를 처리합니다. 1일에서 6일까지 상용 키트의 SMAD 억제제를 포함하는 따뜻한 신경 유도 배지로 전체 배지를 교체합니다. 7일째에 세포 박리 용액을 사용하여 NPC를 계대시키고, 24웰 플레이트의 웰당 1 내지 2 x 105 세포의 안착 밀도로 플레이트합니다.
희소돌기아교세포 전구체 세포를 생성하려면 상용 키트의 SMAD 억제제가 있는 따뜻한 신경 유도 배지에 NPC를 도금합니다. 8일째에 OPC 분화 배지에 1% DMSO 용액을 준비하고 도금된 NPC를 24시간 동안 처리합니다. 9일째에 배지를 DMSO가 없는 신선한 OPC 분화 배지로 교체한 다음 15일까지 격일로 세포에 먹이를 줍니다.
세포가 15일 이전에 합류에 도달하면 웰당 1 내지 2 x 105 세포의 파종 밀도로 계대시킵니다. 14일째에, OPC 분화 배지에 24웰 플레이트에서 웰당 1 내지 2 x 105 세포의 밀도로 OPC를 플레이트합니다. 15일째에 배지를 OL 성숙 배지로 교체합니다.
격일로 또는 매일 매체를 교체하십시오. 세포가 90% 합류에 도달하면 최대 2개의 계대 동안 또는 세포 분열이 크게 느려질 때까지 1:3 비율로 분할합니다. OPC가 너무 빨리 분열하여 3일 이내에 컨플루엔션에 도달하는 경우 1-3일 동안 2-5마이크로몰 농도의 Ara-C를 첨가합니다.