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신경과학
0 조회수 • 4:48 분 • July 8th, 2025
초가 풍부한 신경이 풍부한 환경에서 신경교 전구 세포에서 유래한 종양인 미만성 내인성 뇌교 신경아교종을 포함하는 뇌간 조직 조각으로 시작합니다.
단백질 분해 효소로 처리하여 조직의 세포외 기질을 분해합니다.
배양 후, 세포 해리 및 수초의 분해를 촉진하기 위해 내용물을 반복적으로 피펫팅합니다.
여과하고 원심분리하여 세포를 수집합니다. 상청액을 제거하고 차가운 완충액에 재현탁합니다.
밀도 구배 분리를 위해 자당 용액을 첨가하고 완전히 혼합합니다.
다음으로, 원심분리하여 더 가벼운 수초 파편에서 더 무거운 세포를 분리합니다.
미엘린 층을 제거하고 RBC 용해 완충액을 추가합니다.
용해 작용을 중지하기 위해 콜드 완충액을 첨가하십시오. 원심분리하고 상청액을 제거하여 용해된 적혈구를 제거합니다.
세포를 따뜻한 신경기저 배지에 재현탁하고 코팅되지 않은 플라스크에서 배양합니다.
신경친성 인자의 부재는 신경 세포 사멸을 유발하는 반면, 신경교 전구 세포는 영양분과 성장 인자를 활용하여 증식을 유도합니다. 성장 인자 수치를 유지하기 위해 신선한 배지를 첨가하십시오.
시간이 지남에 따라 이러한 세포는 자발적으로 세포 클러스터로 응집되어 자유롭게 떠다니는 신경구를 형성합니다.
이 절차에서는 나머지 조직 조각이 들어 있는 원추형 튜브를 5분 동안 원심분리합니다. 그 후, 상청액을 제거하고 예열된 효소 소화 용액을 첨가하여 조직 1 밀리리터당 5 밀리리터의 소화 용액이 되도록 합니다. 그런 다음 원추형 튜브 뚜껑을 실험실 필름으로 밀봉하고 섭씨 37도의 회전 장치에서 30분 동안 반응을 배양합니다.
배양 후 샘플을 부드럽게 분쇄합니다. 10밀리리터 혈청학적 피펫을 사용하여 샘플을 위아래로 6-8회 피펫팅하고 과도한 기포가 발생하지 않도록 합니다. 그런 다음 피펫 끝에 1000마이크로리터 피펫 팁을 추가하고 샘플을 추가로 6-8회 분쇄합니다.
남은 덩어리가 튜브 바닥에 가라앉도록 하십시오. 그런 다음 100미크론 필터를 통해 세포가 여전히 부유한 상태에서 상청액을 제거하고 효소 해리로 표시된 새로운 50밀리리터 원뿔형 튜브에 넣고 얼음 위에 보관합니다. 그 후, 효소 해리 튜브를 5분 동안 원심분리하고 자당 구배 원심분리를 계속합니다. 샘플이 여전히 용액에 현탁되어 있으면 5분 동안 원심분리합니다.
다음으로, 상청액을 제거하고 칼슘과 마그네슘이 없는 20밀리리터의 차가운 HBSS에 조직을 재현탁합니다. 그런 다음 차가운 HBSS로
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