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합성 고분자와 접착 단백질로 코팅된 배양 플레이트로 시작합니다.
소분자 억제제가 보충된 운동 뉴런 분화 배지에 재현탁된 척수 신경 전구 세포를 추가합니다.
코팅된 플레이트 표면은 세포 접착을 촉진합니다.
소분자 억제제는 특정 단백질 키나아제를 차단하여 세포 사멸을 예방합니다.
사용한 배지를 제거하고 신선한 분화 배지를 추가합니다.
배지에는 신경 전구세포가 운동 뉴런 전구세포로 분화되는 것을 촉진하는 화합물이 포함되어 있습니다.
또한 신경교 헌신적 전조가 나타납니다.
다음으로, DNA 합성 억제제가 보충된 분화 배지로 교체합니다.
이러한 억제제는 신경교 전구세포에서 DNA 손상과 사멸을 선택적으로 유도하는 반면, 운동 뉴런 전구세포는 성숙한 뉴런으로 분화합니다.
세포를 완충액으로 세척하고 억제제 없이 분화 배지를 첨가하여 뉴런을 유지합니다.
배양하는 동안 정기적으로 배지를 교체하여 영양분을 보충하십시오.
또한 배지를 접착 단백질이 보충된 배지로 교체하여 신경 부착을 강화하여 균질한 운동 뉴런 배양을 확립합니다.
신경 전구 세포 배양물이 동결된 경우 해동하십시오. 원고에 설명된 대로 배지 교환 및 PBS 헹굼 후, 0.02 마이크로몰 시토신 아라비노사이드를 포함하는 운동 뉴런 분화 배지로 배지를 교체합니다.
그런 다음 세포를 섭씨 37도 및 5% 이산화탄소에서 48시간 동안 배양하면 신경교 전구세포가 세포 클러스터에 응집된 유사분열 후 운동 뉴런 전구세포 아래에서 단일 증식 편평 세포로 나타납니다. 나중에 원고에 표시된 대로 매체 교환을 수행합니다.