0 조회수 • 2:57 분 • July 8th, 2025
합성 고분자와 접착 단백질로 코팅된 미세유체 장치를 가져 가십시오.
이 장치는 마이크로 홈으로 분리된 우물과 상호 연결된 배양 챔버로 구성됩니다.
챔버에는 조직 배치를 위한 천공 구멍이 있습니다.
삼차신경절의 집합체인 삼차신경절과 성인 치아로 발달하는 산전 구조인 치아 배아를 마우스 배아에서 얻습니다.
구멍에 티슈를 넣고 각각의 배양 배지를 추가합니다.
치아 배아 배지의 영양소와 비타민은 배양 중 치아 배아 생존을 촉진합니다.
삼차신경절 매질의 코팅된 장치 표면과 성장 인자는 신경돌기와 축삭 성장을 촉진합니다.
축삭은 미세 홈을 통해 치아 배아실에 도달합니다.
치아 유래 신호는 신경 반발을 유발하여 축삭이 치아 배아를 신경분포하지 않고 둘러싸도록 합니다.
배양 챔버를 완충액으로 세척하고 고정제로 조직을 고정합니다.
공동 배양은 이제 추가 분석을 위한 준비가 되었습니다.
삼차신경절과 치아 세균을 해부한 후 미세유체 장치에서 라미닌을 제거하고 챔버를 200마이크로리터의 각 배지로 채웁니다. 집게를 사용하여 해부된 삼차신경절과 치아 세균을 생검 펀치로 만든 구멍으로 부드럽게 옮깁니다. 치아 세균이 뜨지 않고 커버슬립에 닿을 때까지 가라앉는지 확인하십시오.
샘플을 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%의 인큐베이터에서 배양합니다. 10일 동안 48시간마다 배양 배지를 교체하십시오. 배지를 변경하려면 먼저 피펫을 웰 바깥쪽으로 향하게 하여 배지를 제거합니다. 그런 다음 챔버 반대편에 위치한 우물 측면에 신선한 예열된 배지를 추가합니다.
배양 기간 동안 광학 현미경을 사용하여 언제든지 공동 배양을 이미지화합니다. 배양 기간이 끝나면 150마이크로리터의 PBS를 챔버당 하나의 웰에 피펫팅하고 PBS가 챔버를 통해 흐르도록 하여 챔버를 세척합니다. 총 3회 세탁을 반복합니다.
마지막 세척 후, PBS를 제거하고 PBS에 함유된 150마이크로리터의 4% 파라포름알데히드를 챔버당 하나의 웰에 피펫팅하고 다른 챔버로 흐르도록 하여 샘플을 고정합니다. 장치를 실온에서 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 PBS로 챔버를 두 번 세척하고 면역형광 염색 및 파생물 이미징과 같은 추가 분석을 진행합니다.