희소돌기아교세포-조건화된 배지를 생성하는 방법

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폴리머로 코팅된 페트리 접시를 가져 가십시오.

희소돌기아교세포 계통 또는 OL 세포를 적절한 배양 배지에 넣고 배양합니다.

폴리머 코팅의 양전하가 음전하를 띤 세포막을 끌어당겨 접시에 대한 세포 부착을 향상시킵니다. 배지의 성장 인자와 영양소는 세포 확장을 촉진합니다.

배지를 영양이 부족한 배지로 교체하고 배양합니다.

영양 수준이 낮으면 세포에 가벼운 스트레스가 발생하여 단백질, 지질 및 성장 인자 및 사이토카인을 포함한 기타 분자가 세포외 공간으로 분비됩니다.

배지를 튜브에 모으십시오.

필터는 배지를 멸균하여 세포 파편과 불용성 성분을 제거합니다.

OL 세포에서 분비되는 가용성 생리 활성 분자를 포함하는 여과액을 희소돌기아교세포 조절 배지 또는 OCM이라고 합니다.

단백질 및 기타 분자의 분해를 방지하기 위해 OCM을 더 사용할 때까지 더 낮은 온도에 보관하여 OCM의 효과를 보존하십시오.

2개 또는 3개의 사전 코팅된 100mm 페트리 접시에 10밀리리터의 세포 현탁액을 접시합니다.

산화탄소 5% 이하에서 섭씨 37도의 가습 인큐베이터에서 배양합니다.

멸균 조건의 층류 후드에서 10밀리리터의 따뜻한 Mbb 27 저배지로 배양 배지를 갱신합니다.

산화탄소 5%의 섭씨 37도에서 가습된 인큐베이터에서 2일 동안 배양합니다.

OCM을 수확하려면 희소돌기아교세포 분비 인자를 포함하는 상청액을 수집합니다. 0.22미크론 필터를 사용하여 OCM을 필터 멸균합니다.

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Last updated: 27 June 2026