신경 세포 배양을 위한 콜라겐 코팅 구획 배양 접시의 준비

배양 접시에 콜라겐 용액을 첨가하는 것부터 시작하십시오.

용액의 산성 pH는 콜라겐 매트릭스 형성을 방지합니다.

여분의 용액을 제거하십시오.

수산화암모늄에 적신 거즈 패드와 함께 접시를 쟁반에 담습니다. 암모니아 연기를 담을 수 있도록 뚜껑을 덮습니다.

이 증기는 pH를 높여 산성 환경을 중화합니다.

중화는 콜라겐 분자 사이의 정전기 반발력을 방해하여 안정적인 매트릭스를 형성할 수 있도록 합니다. 중앙을 가로질러 수평 스크래치를 만듭니다.

구

획이 있는 챔버의 바닥에 비반응성 그리스를 바르십시오.

이제 접시의 긁힌 표면을 챔버에 부착합니다.

뒤

집어서 그리스를 바른 채 중앙 구획을 밀봉합니다.

누출을 확인하기 위해 미디어를 추가합니다. 누출을 그리스로 밀봉하십시오.

이것은 신경 세포를 위한 중앙 구획과 종양을 위한 측면 구획의 세 가지 구획 시스템을 형성합니다.

신경 세포는 긁힌 부분을 따라 측면 구획까지 자라며 축삭에 수초를 생성하여 종양-세포 상호 작용에 대한 연구를 용이

하게 합니다.

구획 배양 접시를 조립하려면 콜라겐 원액을 멸균 증류수에 밀리리터당 500마이크로그램으로 희석하고 완전히 혼합합니다. 멸균 이송 피펫을 사용하여 35mm 배양 접시에 희석된 콜라겐 용액 2ml를 채웁니다. 그런 다음 접시를 약간 기울이고 용액을 제거하여 얇은 콜라겐 막을 남깁니다. 용액을 다음 35mm 접시에 분배합니다. 이 과정을 반복하여 모든 접시가 코팅될 때까지 필요에 따라 콜라겐 용액을 더 추가합니다.

층류 후드에서 콜라겐을 중합하려면 거즈 패드에 농축 수산화암모늄 3밀리리터를 적시고 트레이를 15분 동안 덮습니다. 거즈 패드를 제거하고 35mm 접시를 건조시킵니다. 그런 다음 금속 줄을 사용하여 18게이지 바늘의 끝을 줄로 줄질하여 뭉툭한 끝을 만듭니다. 바늘을 70% 에탄올에 담가 살균합니다. 구획이 있는 챔버의 바닥에 실리콘 그리스를 바릅니다. 그리스가 깔끔하게 놓여 있고 모든 모서리가 겹치는지 확인하십시오.

이 기술은 매우 어려울 수 있으므로 축삭 성장을 보장하기 위해 구획 챔버를 설정하기 전에 정확한 양의 그리스를 바르는 연습을 하는 데 추가 시간을 할애하는 것이 좋습니다. 천천히 작업하는 것도 매우 중요합니다. 필요하다고 생각하는 것보다 더 많은 챔버를 설치하여 문제가 발생할 경우 추가 공간을 확보하십시오.

35mm 접시에서 뚜껑을 제거합니다. 접시를 뒤집고 챔버 위에 흠집을 놓습니다. 집게로 접시 바닥을 부드럽