신경 능선 세포 배양을 위해 병아리 배아에서 두개골 신경 주름 분리

여과지 프레임 안에 지지된 병아리 배아를 가져와 해부 현미경 아래에 놓습니다.

배아를 둘러싼 보호 코팅인 vitelline membrane을 제거합니다.

시엽 뒤쪽과 성숙한 심장의 배아 전구인 심장 초승달 앞쪽에 위치한 중뇌 신경 주름을 식별합니다.

신경 주름에는 발달 중에 이동 세포로 변형되는 다능성 줄기 세포인 전이동 신경능선 세포가 포함되어 있습니다.

이러한 이동 세포는 신경 세포와 비신경 세포로 분화합니다.

신경 주름의 가장 등쪽 측면을 절제하고 조직을 완충액이 들어 있는 배양 접시로 옮깁니다.

다음으로, 접착 단백질로 코팅된 커버슬립을 배지가 들어 있는 배양 플레이트 웰에 놓습니다.

신경 주름을 코팅된 커버슬립에 옮깁니다. 조직 부착을 용이하게 하기 위해 배양합니다.

배양하는 동안 이동성 신경능선 세포가 신경 주름에서 코팅된 표면으로 나타나 신경능선 세포 배양을 확립합니다.

Ringer's Pen-Strep 용액이 들어 있는 깨끗한 접시에 배아를 옮깁니다. 배아를 앞뒤로 부드럽게 휘두르며 시야를 가리는 노른자를 제거하고, 링거펜-연쇄상구균 용액을 교환하거나 흐려지면 새 접시에 옮깁니다. 배아의 등쪽과 프레임 면을 해부 현미경 아래에 배치합니다. 배아를 종이 프레임에 그대로 두어 늘어나고 제자리에 고정합니다.

그런 다음 겸자를 사용하여 백자막을 제거하여 신경 주름을 노출시킵니다. 확장되는 시소포에 꼬리 조직과 마름모꼴 수축이 막 나타나기 시작한 후뇌에 주둥이를 포함합니다. 스프링 가위를 사용하여 중뇌 신경 주름을 조심스럽게 절제합니다. 신경관과 비신경 외배엽의 오염을 최소화하면서 신경주름의 등쪽을 거의 절제하고 신경주름을 P20 피펫터 또는 노른자 링거펜-연쇄상구균 용액으로 헹군 멸균 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 링거펜-연쇄상구균 용액이 들어 있는 깨끗한 접시에 신경주름을 옮깁니다.

수집된 접힌 부분을 얼음 위에 보관하면서 추가 접힌 부분을 해부합니다. 인큐베이터에서 배양 접시를 제거한 후 피펫터 또는 파스퇴르 피펫을 사용하여 커버슬립 접시 또는 웰에서 피브로넥틴 용액을 제거합니다. 피브로넥틴 코팅 기질을 링거펜-연쇄상구균 용액으로 헹군 후, 적당량의 완전 배양 배지를 접시 또는 웰에 추가합니다.

플라스틱을 막고 조직이 달라붙는 것을 방지하려면 P20 또는 P200 피펫터를 사용하고 노른자 Ringer's Pen-Strep 용액으로 피펫 팁을 헹굽니다. 그런 다음 고립된 신경 주름을 피브로넥틴으로 코팅