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신경과학
0 조회수 • 4:41 분 • July 8th, 2025
쥐 강아지 머리의 절반을 가져다가 뇌를 제거합니다.
두개골 상단을 자르고 주변 조직을 절제하여 내이 구조를 보호하는 뼈 외부 층인 귀낭을 시각화합니다.
완충 배지가 들어 있는 배양 플레이트로 조직을 옮깁니다.
전정신경 세포체를 포함하는 상전정 신경절과 하 전정 신경절을 분리합니다.
뼈 능선을 깎고 밑에 있는 상신경절을 채취합니다.
상부 신경절을 완충 배지가 들어 있는 신선한 플레이트로 옮깁니다.
고립된 신경절을 청소하기 위해 표면에서 부착 조직을 제거합니다.
단백질 분해 효소가 포함된 용액에 신경절을 넣으십시오.
효소는 조직의 세포외 기질을 분해하여 세포를 느슨하게 합니다.
신경절을 배양 배지가 들어 있는 폴리머 코팅된 유리 바닥 접시로 옮기고 조직을 기계적으로 해리시켜 세포를 방출합니다.
배양하여 세포가 부착되고 전정 신경절 뉴런 배양을 확립할 수 있도록 합니다.
닫힌 수술용 가위를 사용하여 안락사된 쥐의 뇌를 퍼냅니다. 뇌신경을 절단하고 제거하여 두개골에서 뇌를 완전히 분리합니다. 머리 뒤쪽부터 시작하여 집게로 투명한 막 물질을 떼어낸 다음 수술용 가위를 사용하여 두개골 꼭대기를 잘라냅니다.
머리와 목 뒤쪽의 여분의 조직을 제거하여 해부 부위와 이낭을 더 깨끗하고 쉽게 접근할 수 있도록 합니다. 조직을 신선한 L-15 용액이 담긴 두 번째 페트리 접시로 옮깁니다. 그런 다음 귀낭과 청각, 상전정 및 하전정 신경을 찾습니다. 작은 스프링 가위를 사용하여 상신경절과 하신경절을 분리하고 청각 신경을 잘라냅니다.
메스를 사용하여 뼈 능선을 부드럽게 면도하여 신경이 뼈 캡슐로 잠수하는 뼈 부위를 약화시킵니다. 메스로 파편을 조심스럽게 제거하여 신경절의 부은 부분 전체를 노출시킵니다.
가는 스프링 가위를 사용하여 난관을 향해 잠수하는 말초 신경 가지에서 신경절을 자르고 분리합니다. 미세한 겸자를 사용하여 상부 신경절을 제거하고 신선한 L-15 용액이 담긴 35mm 페트리 접시로 옮깁니다.
효소 용액을 예열한 후 효소 혼합물을 35mm 페트리 접시에 붓고 섭씨 37도의 인큐베이터에 10-15분 동안 넣습니다. 미세한 집게와 작은 스프링 가위를 사용하여 뼈, 과도한 조직, 신경 섬유 및 기타 불필요한 구조를 제거하여 신경절을 청소하십시오. 신경절 조직의 제거를 최소화하도록 주의하십시오.
세척된 신경절을 예열된 효소 용액에 옮기고 10-40분 동안 인큐베이터에 다시 넣습니다. 그런 다음 신경절을 신선한 L-15 용액이 담긴 35mm 페트리 접시로 옮깁니다.
2-3분 후, 신경절을 여과된 배양 배지로 채워진 다른 35mm 페트리 접시로 옮깁니다. 약 150마이크로리터의 여과된 배양 배지를 코팅된 유리 바닥 접시에 옮깁니다. 그런 다음 원하는 수의 신경절을 커버슬립으로 옮깁니다.
배양 접시에서 소량의 배양 배지를 추출하고 조직이 유리 피펫 측면에 달라붙는 것을 방지하기 위해 분쇄 피펫을 배지로 헹굽니다. 신경절이 충분히 해리될 때까지 피펫을 통해 조직을 부드럽고 반복적으로 통과시켜 분쇄합니다.
5분 후 광학 현미경으로 세포가 커버슬립에 침전되었는지 확인합니다. 배양 접시를 섭씨 37도의 인큐베이터에 12-24시간 동안 조심스럽게 넣습니다.