0 조회수 • 3:45 분 • July 8th, 2025
돼지 뇌를 예로 들어 보겠습니다.
뇌를 덮고 있는 보호막인 수막을 제거하여 수막 세포 오염을 방지합니다.
모세혈관이 풍부한 영역인 회백질을 긁어내고 배지가 들어 있는 배양 접시에 조직을 수집합니다.
바늘 없이 주사기를 통해 회백질을 통과시켜 조직을 파편화합니다.
조각을 균질화기로 옮기고 균질화하여 조직을 더 분해하여 뇌 모세혈관을 방출합니다.
모세혈관을 유지하기 위해 특정 기공 크기의 필터를 통과시켜 다른 뇌 세포가 흐르도록 균질을
통과시킵니다.필터를 효소와 DNase가 포함된 용액에 넣습니다.
효소는 부착 세포를 분리하는 반면, DNase는 오염된 DNA를 분해하여 순수한 모세혈관의 분리를 촉진합니다.
필터에서 모세관을 씻으십시오.
효소를 비활성화하기 위해 혈청 단백질이 포함된 배지를 첨가합니다.
모세혈관을 튜브로 옮기고 원심분리한 다음 상청액을 제거합니다. 추가 분석을 위해 순수한 모세혈관을 신선한 배지에 재현탁합니다.
이 절차를 시작하려면 뇌를 멸균 흐름 벤치에 놓고 얼음 위에 놓인 비커에 1리터의 PBS로 부드럽게 씻습니다. 다음으로, 끝이 가는 집게를 사용하여 각 뇌에서 수막을 조심스럽게 제거합니다. 메스를 사용하여 뇌에서 회백질을 한 번에 하나씩 긁어내고 분리된 물질을 얼음 위에 놓인 20밀리리터의 DMEM/F12가 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다.
초기 단편화의 경우 바늘 없이 50밀리리터 주사기를 통해 회백질 물질을 통과시킵니다. 모든 뇌에 대해 절차를 반복하고 수집된 회백질 물질을 함께 모으십시오. DMEM/F12 배지로 분리된 회백질 물질을 휴대용 조직 균질화기의 그라인더 튜브로 옮깁니다. 느슨한 유봉으로 8번의 위아래 스트로크를 한 다음 꽉 조이는 유봉으로 8번의 위아래 스트로크를 하여 재료를 균질화합니다.
다음으로, 필터 홀더와 140미크론 필터 메쉬가 있는 500밀리리터 파란색 캡 병을 사용하여 균질액을 여과하여 모세관을 분리합니다. 필터가 포함된 모세관을 소화 용액과 함께 페트리 접시에 넣습니다. 그런 다음 페트리 접시를 섭씨 37도에서 180RPM의 궤도 셰이커에서 1시간 동안 배양하거나 10분마다 부드럽게 저어줍니다.
1시간 후 페트리 접시의 현탁액으로 필터에서 모세관을 씻어냅니다. 그런 다음 세 접시의 현탁액을 두 개의 50밀리리터 튜브로 나누고 각 50밀리리터 튜브에 10밀리리터의 DMEM/F12를 첨가하여 소화를 중지합니다.
세포 현탁액을 섭씨 4도의 250배 g에서 5분 동안 원심분리합니다. 그 후, 상청액을 흡인하고 각 펠릿을 10밀리리터의 DMEM/F12에 재현탁합니다. 그런 다음 각 튜브에 DMEM/F12 20밀리리터를 더 추가합니다.
본 논문은 in vitro 혈뇌장벽(BBB) 모델을 구축하기 위해 신선한 돼지 뇌에서 모세혈관을 분리하는 개선된 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 추가 분석 또는 세포 배양 응용에 적합한 순수 뇌 모세혈관을 얻기 위해 뇌수막의 세심한 제거, 정밀한 조직 처리 및 효소 소화를 강조합니다.
돼지 뇌 모세혈관의 신뢰할 수 있는 분리는 중추신경계(CNS) 약물 발견의 결정적인 전환점인 강력한 인비트로(in vitro) 혈액-뇌 장벽(BBB) 모델 개발의 기초가 됩니다. 고순도의 모세혈관 표본 준비를 통해 화합물의 투과도를 예측 평가하고, 파이프라인 초기 단계에서 기전적 리스크를 제거할 수 있습니다. 이러한 역량은 신경 치료 프로그램의 중개 연구 연속성과 포트폴리오 우선순위 선정을 지원합니다.
본 모세혈관 분리 프로토콜은 초기 발견과 분석법 개발의 접점에 위치하며, 후속 BBB 모델링 및 화합물 스크리닝 워크플로우를 가능하게 합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026