0 조회수 • 3:43 분 • July 8th, 2025
한쪽 가장자리에 흰색 패드와 흰색 LED 조명이 장착된 아크릴 보드가 포함된 측면 소프트 라이트 조명 설정을 사용하십시오.
배아체 형성 배지를 포함하는 저접착 멀티웰 플레이트를 앞쪽에 배치합니다.
배아체 또는 EB를 플레이트에 추가합니다.
LED 조명은 아크릴 보드 측면에서 들어와 평행 빔을 방출하여 EB를 측면으로 비추고 육안으로 시각화할 수 있습니다.
플레이트를 회전시켜 소용돌이 흐름을 유도하여 EB를 중앙으로 수렴시킵니다.
사용한 배지를 신선한 EB 형성 배지로 교체하십시오.
와이드 보어 피펫 팁을 사용하여 EB를 수집합니다.
EB가 중력에 의해 가라앉을 수 있도록 피펫을 똑바로 세웁니다.
EB를 신경 유도 배지가 포함된 다른 저접착 플레이트로 옮깁니다.
팁을 매체에 대십시오. EB는 액체 표면 장력으로 인해 가라앉습니다.
배지의 특정 요인은 EB에서 신경 분화를 시작하여 신경상피층을 형성합니다.
A5 용지 크기로 두께 0.3-0.5cm의 투명 아크릴 보드를 사용하고 아크릴 판의 앞면과 뒷면에 흰색 패드를 붙입니다. 다음으로, 접시 가장자리에 LED 백색광 한 줄을 설치하여 조명이 아크릴 판 측면에서 들어온 다음 평행하게 발사될 수 있도록 합니다.
이제 새로운 6웰 저접착 플레이트를 준비하고 각 웰에 2밀리리터의 EB 형성 배지를 추가합니다. 1000마이크로리터 와이드보어 피펫 팁을 사용하여 배지와 함께 EB를 제거한 후 웰당 약 100개의 EB를 6웰 저접착 플레이트로 옮깁니다.
EB 형성 배지를 매일 동일한 부피의 신선한 배지로 교체하려면 원형 궤도를 따라 접시를 회전시켜 소용돌이 흐름을 유도합니다. EB 또는 오가노이드는 회전을 통해 생성된 2차 흐름으로 인해 우물의 중심에 수렴합니다. 우물 가장자리까지 천천히 피펫팅하여 오래된 배지를 흡인합니다. 너무 세게 빨지 않으면 EB가 함께 제거됩니다. 그런 다음 새 배지를 추가하여 EB를 재현탁합니다.
신경 유도를 위해 웰당 3밀리리터의 신경 유도 배지가 포함된 새로운 6웰 저접착 플레이트를 준비합니다. 측면 소프트 라이트를 켜고 다른 실내 광원을 끕니다. 이제 EB와 배양 배지를 모두 빨아들이기 위해 입이 넓은 피펫 팁을 사용하여 신경 유도 배지가 추가된 6웰 플레이트로 EB를 옮깁니다. 그런 다음 피펫을 똑바로 세웁니다. EB는 중력에 의해 점차 가라앉고 피펫 팁의 입구 쪽으로 수렴합니다.
피펫 팁의 입구가 다시 액체 표면에 닿을 때, 그리고 액체 표면 장력으로 인해 EB는 매체에 빠르게 가라앉습니다. 샘플을 섭씨 37도 및 이산화탄소 5%에서 24시간 동안 배양합니다.