배양된 초파리 뇌 외식에서 신경 줄기세포 재활성화 분석

외부 자극에 반응하여 초파리 뇌 신경 줄기 세포(NSC)는 세포 주기 정지 상태인 정지를 종료하고 재활성화하여 증식을 시작합니다.

NSC가 생체 내에서 자연적으로 정지에서 벗어나는 단계인 갓 부화한 초파리 유충을 예로 들어 보겠습니다.

입 갈고리와 몸통을 잡고 유충을 쪼개십시오.

입 갈고리 뒤의 뇌를 찾아 절제합니다.

뇌를 배지가 들어 있는 배양 플레이트 웰로 옮깁니다.

처리된 우물에서 배지에는 테스트 호르몬이 포함되어 있지만 대조군 우물에는 호르몬이 부족합니다. 인큐베이트.

제어 조건에서 NSC는 외부 자극이 없기 때문에 정지 상태를 유지합니다.

처리된 우물에서 호르몬은 특정 NSC 수용체에 결합하여 다운스트림 신호 전달 경로를 활성화하고 NSC를 재활성화합니다.

재활성화된 NSC는 세포 주기에 들어가 증식을 겪습니다.

배양 후 뇌는 이제 NSC 증식을 시각화하고 호르몬의 재활성화 가능성을 확인하기 위한 다운스트림 분석을 위한 준비가 되었습니다.

SSM으로 두 번째 유리 시계 접시에 놓인 유충에서 뇌를 해부하고 해부 현미경으로 겸자를 사용하고 필요에 따라 배율을 조정합니다. 집게를 하나로 입고리를 잡고, 다른 집게로 몸통을 반쯤 부드럽게 잡고 반대 방향으로 당겨 유충을 두 조각으로 쪼개줍니다. 15-20개의 뇌를 해부한 후, 멸균 24웰 배양 트레이의 한 웰에 1밀리리터의 SSM을 추가합니다. 마이크로피펫과 멸균 팁을 사용하여 새로 해부된 뇌를 SSM으로 옮긴 다음 섭씨 25도에서 24시간 동안 뇌와 함께 배지를 배양합니다.