면역자기 비드를 사용한 쥐 1차 희소돌기아교세포 분리

0 조회수3:06 • July 8th, 2025

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강아지로부터 미성숙 희소돌기아교세포와 일차 신경 세포를 포함한 신경 세포 현탁액을 채취합니다.

세포가 응집되는 것을 방지하기 위해 세포를 마그네틱 세포 분류 완충액에 재현탁합니다.

표면에 항-O4 항체를 운반하는 조작된 자성 마이크로비드를 추가합니다. 균일한 혼합을 보장하기 위해 용액을 교반하십시오.

마이크로비드가 희소돌기아교세포의 O4 항원인 황산화 갈락토지질과 결합할 수 있도록 배양하고 다른 세포는 결합되지 않거나 느슨하게 결합된 상태로 유지됩니다.

추가 세포 분류 완충액으로 혼합물을 세척합니다.

원심분리하여 상청액을 버린 다음 세포를 재현탁합니다.

다음으로, 비드 결합 세포를 더 큰 세포 덩어리를 제거하는 필터가 장착된 자기 분리 컬럼에 통과시킵니다.

실행 중에 자기장 아래에서 비드 결합 복합체는 자석 쪽으로 이동하여 측면에 부착됩니다.

결합되지 않은 세포와 느슨하게 결합된 세포를 제거하기 위해 세척하십시오.

분리기에서 컬럼을 회수하고 증식 배지로 세척하여 향후 적용을 위해 1차 희소돌기아교세포를 수집합니다.

계수 후, 세포를 다시 원심분리하고 1 x 107 세포당 90마이크로리터의 신선한 자기 세포 분류 완충액에 펠릿을 재현탁합니다. 다음으로, 1 x 107 세포당 10마이크로리터의 항-O4 비드를 추가하고 세포 용액을 부드럽게 넘기면서 혼합합니다. 섭씨 4도에서 15분 후 5분마다 부드럽게 튕기면서 원심분리로 세척하기 위해 1 x 107세포당 2밀리리터의 자성 세포 분류 완충액을 부드럽게 첨가하고 조심스럽게 진공 흡인으로 상청액을 버립니다.

1 x 107 세포마다 500마이크로리터의 신선한 자기 세포 분류 완충액에 펠릿을 재현탁하고 적절한 크기의 마그네틱 비드 분류 컬럼을 해당 자기 분리기에 넣습니다. 40미크론 스트레이너를 컬럼에 놓고 3밀리리터의 마그네틱 셀 분류 완충액으로 스트레이너를 미리 헹구어 컬럼이 건조되지 않고 버퍼가 컬럼을 통과하도록 합니다. 세포를 스트레이너에 첨가한 다음 자기 세포 분류 완충액으로 1밀리리터 세척합니다.

세척당 3밀리리터의 자성 세포 분류 완충액으로 컬럼을 3회 세척하고 희소돌기아교세포 증식 배지로 1회 세척합니다. 그런 다음 컬럼을 15밀리리터 튜브로 옮기고 플런저를 사용하여 컬럼을 통해 5밀리리터의 신선한 희소돌기아교세포 증식 배지를 즉시 세척합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026