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신경과학
0 조회수 • 4:27 분 • July 8th, 2025
소 꼬리를 가져가십시오.
위에 있는 조직과 척추 돌기를 제거한 다음 가로로 절단하여 세그먼트를 얻습니다.
성장판과 척추 종판 사이에 위치한 추간판 또는 IVD를 식별합니다.
IVD의 양쪽을 자르고 조직 생존력을 유지하기 위해 완충액에 적신 거즈가 들어 있는 접시에 넣습니다.
부착된 척추 조직을 긁어내고 IVD 높이를 측정합니다.
완충액으로 세척하여 잔여물을 제거하고 항생제가 포함된 완충액에서 IVD를 소독합니다.
배지가 들어 있는 바이오리액터 챔버에 IVD를 넣습니다.
생리학적 그룹의 배지는 포도당이 높은 반면, 병리학적 그룹의 배지는 저포도당 배지가 영양 결핍을 유발합니다.
챔버를 생물 반응기에 놓습니다.
생리적 IVD의 경우 매일 부드럽게 부하를 가하십시오. 병리학적 IVD의 경우 매일 더 높은 속도로 강렬한 부하를 가합니다.
일일 로딩 테스트 사이에 IVD가 배지에서 회복되도록 합니다.
모든 로딩 절차가 끝나면 IVD 높이를 측정합니다.
병리학적 IVD의 감소된 높이는 퇴행성 및 전염증성 상태를 나타냅니다.
먼저 소꼬리 전체를 수돗물로 깨끗이 헹구어 표면의 먼지와 털을 제거합니다. 그런 다음 꼬리를 1% 베타딘 용액에 10분 동안 담가 표면을 소독합니다. 20번 메스를 사용하여 꼬리 척추에서 연조직을 제거하여 추간판 또는 IVD를 쉽게 식별할 수 있습니다.
뼈 제거 펜치로 척추의 극돌기와 가로 돌기를 제거합니다. 각 척추체의 중앙을 뼈 펜치로 가로로 절단하여 개별 동작 세그먼트를 얻은 다음 수집된 동작 세그먼트를 링거 용액에 적신 거즈와 함께 페트리 접시에 넣습니다.
모션 세그먼트를 부드럽게 움직여 IVD와 척추뼈를 찾습니다. 그런 다음 뼈 끝판의 볼록한 면을 만지고 찾아 성장판의 위치를 식별합니다. 띠톱의 날을 링거 용액으로 냉각하고 이를 사용하여 IVD의 성장판에 양쪽에 하나씩 두 개의 평행한 절단을 만듭니다.
IVD를 링거 용액에 적신 깨끗한 거즈가 있는 깨끗한 페트리 접시로 옮깁니다. 메스 칼날을 사용하여 척추체와 성장판을 긁어내고 종판은 그대로 둡니다. 로딩 절차를 위해 두 표면을 평평하고 평행하게 배치하고 긁은 IVD를 링거 용액에 적신 거즈가 있는 신선한 페트리 접시로 옮깁니다.
캘리퍼스로 디스크 높이와 직경을 측정합니다. 그런 다음 제트 세척 시스템을 사용하여 링거 용액으로 척추뼈의 혈전을 청소합니다. PBS와 10% 페니실린-스트렙토마이신으로 IVD를 소독하고 15분 동안 흔듭니다. PBS와 1% 페니실린 스트렙토마이신으로 고농도 항생제를 헹굽니다.
디스크 5밀리리터의 IVD 배양 배지가 들어 있는 IVD 챔버로 옮기고 습도 85%, 이산화탄소 5%의 섭씨 37도에서 인큐베이터가 있는 바이오리액터 시스템에 넣습니다. 실험군에 따라 서로 다른 로딩 조건을 유지하여 바이오리액터 시스템 내에서 4일 동안 디스크를 배양합니다.
생리학적 대조군에서는 하루 2시간 동안 0.02 내지 0.2 메가파스칼 및 0.2 헤르츠의 로딩 프로토콜을 사용하여 고포도당 배지로 IVD를 배양합니다. 병리학적 그룹에서, 하루 2시간 동안 0.32 내지 0.5 메가파스칼 및 5 헤르츠의 로딩 프로토콜을 사용하여 저포도당 배지로 IVD를 배양합니다.
로딩 절차 사이에 자유로운 팽창 회복을 위해 7밀리리터의 IVD 배양 배지가 있는 6웰 플레이트에 IVD를 넣습니다. 자유 팽창 기간 후와 실험 기간 동안 동적 하중 후 캘리퍼스로 매일 디스크 높이를 측정합니다.