0 조회수 • 2:10 분 • July 8th, 2025
형질전환 Caenorhabditis elegans 벌레로부터 얻은 세포의 현탁액을 배양 배지에 취하십시오.
현탁액에는 신경계의 뉴런을 포함하여 다양한 조직의 세포가 포함되어 있습니다.
형질전환 벌레는 소포 막관통 수송체에 접합된 형광 단백질을 발현하도록 조작되었습니다. 신경 전달 물질인 아세틸콜린을 운반하는 시냅스 소포에 존재하는 이 수송체는 몸 전체의 콜린성 뉴런에서 발견됩니다.
세포 현탁액을 원심분리하고 상청액을 버립니다. 형광 활성화 세포 분류 또는 FACS를 위해 세포를 신선한 배양 배지에 재현탁합니다.
FACS를 사용하여 세포 현탁액을 분석합니다. 형광 표지된 콜린성 뉴런은 적절한 파장의 빛에 노출되면 형광을 방출하여 표지되지 않은 다른 세포와 분리합니다.
분리된 뉴런을 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 수분 수준을 유지하기 위해 가습된 챔버에서 세포를 배양합니다.
분리된 세포 현탁액에서 세포를 10,000배 g 및 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 버리고 펠릿화된 세포를 L-15 보충 배지에 밀리리터당 600만 개 이하의 세포 밀도로 재현탁하여 유세포 분석기의 과부하를 방지합니다. 그런 다음 샘플을 분류할 수 있는 유세포 분석기를 사용하여 GFP 양성 발현으로 세포를 분류합니다.
GFP 음성 세포는 비세포 유형 특이적 분석을 위한 대조군으로 사용할 수 있습니다. 그 후, 분리된 세포를 멸균 6웰 플레이트의 웰에 도금합니다. 접시를 플라스틱 용기에 넣습니다. 젖은 물티슈나 부드러운 티슈 페이퍼를 추가하여 세포에 수분을 더하고 섭씨 20도에서 배양합니다.