Obtaining Cerebellum Slices from an Embryonic Chick Brain

적절한 발달 단계에서 수정된 암탉의 알을 섭취하십시오.

배아에 접근하기 위해 껍질을 자릅니다.

머리를 찾아 해부한 다음 냉각된 인산염 완충액이 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다.

눈과 턱을 제거합니다.

두개골 표면에서 피부를 분리하십시오.

다음으로 두개골 뼈를 자르고 제거합니다.

뇌를 노출시키기 위해 주변 결합 조직을 제거하십시오.

전뇌를 분리하십시오.

그런 다음 소뇌를 후뇌와 혈관에서

뇌를 차갑게 식힌 소금 완충액으로 옮깁니다.

배아 소뇌에는 빠르게 분열하는 신경 전구 세포 층이 포함되어 있어 신경 발생 연구에 유용합니다.

소뇌를 조직 다지기의 플랫폼에 놓습니다.

여분의 완충액을 제거하고 소뇌를 얇게 썬다.

슬라이스에 식힌 소금 완충액을 넣으십시오.

뇌 조각을 식힌 소금 완충액이 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다.

현미경으로 추가 분석을 위해 개별 슬라이스를 분리합니다.

시작하려면 수정된 갈색 닭고기 달걀을 배아 14일째가 될 때까지 섭씨 38도의 계란 인큐베이터에 넣습니다. 배아 14일째에 난자에 구멍을 뚫어 배아를 노출시키고 난자에서 병아리 배아의 목을 베십시오. 얼음처럼 차가운 PBS가 들어 있는 페트리 접시에 머리를 넣습니다.

해부 현미경으로 표준 겸자를 사용하여 각 눈 뒤, 조직 전체를 절개하고 눈과 위턱을 제거합니다. 그런 다음 인두를 통해 두 번째 절개를 하여 아래턱을 제거합니다. 그런 다음 표준 겸자를 사용하여 두개골 표면의 피부를 벗겨 제거합니다. 그런 다음 전두엽과 두정골을 제거하여 뇌를 드러냅니다.

복부 측면에서 인두 연골과 보조 중간엽을 제거합니다. 그런 다음 뇌의 등쪽이 위로 향하게 하고 연이 손상되지 않도록 주의하면서 후뇌의 등쪽에 있는 중간엽을 조심스럽게 제거합니다. 다음으로 중뇌와 후뇌 사이의 조직을 끝까지 절개하여 소뇌를 포함한 후뇌를 분리합니다. 소뇌의 측면 접합부와 후뇌의 피라판 모두에서 조직을 끝까지 절개합니다. 해부 전반에 걸쳐 연의 무결성을 유지하도록 주의하면서 소뇌 전체를 제거합니다.

마지막으로, 형성 중인 맥락막 신경총을 제거하고 해부된 소뇌를 얼음처럼 차가운 HBSS로 옮깁니다. 주걱 또는 3밀리리터 파스퇴르 피펫을 사용하여 전체 소뇌를 조직 다지기의 멸균 플랫폼으로 옮기고 팁을 잘라 구멍을 넓힙니다. 피펫을 사용하여 과도한 액체를 제거합니다.

티슈 다지기의 절단 속도를 최대값의 50%로 설정합니다. 그런 다음 소뇌를 필요한 방향으로 300마이크로미터 두께로 자릅니다. 3밀리리터 파스퇴르 피펫을 사용하여 얇게 썬 소뇌를 차가운 HBSS로 덮습니다.

그런 다음 절단된 팁이 있는 3밀리리터 파스퇴르 피펫을 사용하여 HBSS와 슬라이스를 20밀리리터의 얼음처럼 차가운 HBSS가 들어 있는 60밀리미터 페트리 접시로 옮깁니다. 페트리 접시를 광섬유 광원으로 조명하는 해부 현미경 아래에 놓습니다. 그런 다음 시계 제작자 겸자를 사용하여 뇌 조직의 개별 조각을 분리합니다.