iPSC 유래 전구체 세포를 이용한 혈액-뇌 장벽 칩 생성

다공성 멤브레인으로 분리된 중첩된 매트릭스 코팅 채널이 있는 미세유체 칩을 예로 들어 보겠습니다.

상부 채널에 iPSC 유래 신경 전구 세포를 시드합니다. 세포 접착을 위해 배양한 다음 부착되지 않은 세포를 제거하기 위해 세척합니다.

다음으로, iPSC 유래 뇌 미세혈관 내피 세포를 하단 채널에 시드합니다.

칩을 뒤집고 배양하여 내피 세포를 하단 채널의 막 쪽에 부착합니다.

다음으로, 칩을 뒤집어 채널의 아래쪽에 세포를 부착하여 단층 튜브와 같은 구조를 형성합니다. 세포 특이적 배지로 두 채널을 모두 세척합니다.

상부 채널에 신경 분화 배지를, 하부 채널에 내피 세포 배지를 지속적으로 흐르게 합니다.

내피 세포는 배지의 성장 인자를 활용하여 성숙하고 혈관과 유사한 긴밀한 접합을 형성하여 혈액 측면을 형성합니다.

신경영양인자는 신경 전구 세포를 다양한 뇌 세포로 분화시켜 뇌 측을 형성합니다. 이 세포는 내피 세포와 상호 작용하여 칩에 혈액-뇌 장벽을 만듭니다.

시작하려면 준비된 칩이 들어 있는 접시를 생물 안전 캐비닛으로 가져옵니다. P200 피펫을 사용하여 200마이크로리터의 신경 분화 배지를 입구에 추가하고 출구에서 액체를 당겨 두 채널을 부드럽게 세척합니다. 포트와의 접촉을 피하고 칩 표면에서 과도한 미디어 방울을 조심스럽게 흡인하십시오.

균질한 세포 현탁액을 보장하기 위해 세포 현탁액을 부드럽게 교반합니다. iPSC 유래 신경 전구 세포를 상단 채널에 파종하여 뇌 측을 생성하려면 밀리리터당 1 x 10⁶ 세포의 농도로 30 내지 100마이크로리터의 세포 현탁액을 포함하는 P200 팁을 상단 채널 입구에 추가하고 피펫에서 팁을 부드럽게 풀어줍니다.

빈 P200 피펫을 가져와 플런저를 누르고 상단 채널 배출구에 삽입한 다음 팁을 통해 단일 셀 현탁액을 조심스럽게 당깁니다. 칩을 현미경으로 옮겨 상단 채널 내 세포의 균일한 분포에서 파종 밀도를 확인합니다. 20% 커버리지에서 세포 밀도를 확인한 후 즉시 칩을 섭씨 37도에서 2시간 동안 인큐베이터에 넣습니다.

그 후, 신선한 신경 분화 배지를 입구에 넣고 출구에서 피펫으로 액체를 모아 부착되지 않은 세포를 씻어냅니다. 매일 신경 분화 배지를 교체하여 세포를 섭씨 37도의 정적 조건으로 유지합니다. iNPC가 부착된 후 또는 파종 다음 날에 준비된 칩이 들어 있는 접시를 생물 안전 캐비닛으로 가져옵니다. 200마이크로리터의 내피 세포 배지로 하단 채널을 부드럽게