마우스 뇌에서 내측 시상-전방 대상피질 절편의 생성

잘

린 쥐 머리부터 시작하십시오. 피부를 제거하여 두개골을 노출시키고 두개골을 열어 뇌에 접근합니다.

후각 구근을 제거하고 신경 연결을 절단하여 뇌를 얼음처럼 차가운 산소가 함유된 인공 뇌척수액(aCSF)으로 추출합니다.

뇌를 가져다가 내부 해부학적 구조를 노출시키기 위해 각 절반에 두 개의 수직 절단을 합니다.

내측 시상-전대상 피질 또는 MT-ACC 경로를 포함하는 영역을 분리하기 위해 두 개의 각진 절단을 만듭니다. 시상의 일부인 MT는 전두엽 피질의 ACC까지 확장되는 신경 돌기를 통해 중계 스테이션 역할을 합니다.

접착제를 사용하여 각진 판에 뇌를 고정하고 절단하여 뇌를 펼치고 경로를 노출시킨 다음 진동 절개 표본 스테이지에 부착합니다.

비브라톰에 스테이지를 놓고 버퍼를 추가한 다음 MT-ACC 경로를 포함하는 슬라이스를 생성합니다.

생존력을 유지하기 위해 산소가 공급된 aCSF의 지속적인 흐름에 뇌 절편을 유지하십시오.

동물의 두개골을 노출시키고 남은 근육을 잘라냅니다. 다음으로, 롱저를 사용하여 두개골의 등쪽 표면을 벗겨내고 측면을 다듬습니다. 그런 다음 주걱을 사용하여 뇌의 복부 표면을 따라 후각 구근과 신경 연결을 자르고 제거합니다.

얼음처럼 차가운 산소 함유 ACSF로 채워진 비커로 뇌를 빠르게 옮깁니다. MT-ACC 경로를 포함하는 슬라이스를 준비하려면 각 반구의 정중선 측면 2mm 시상 절단을 만들어 피질하 해부학을 표시합니다.

그런 다음 선조체의 눈에 보이는 섬유관과 평행하게 각진 십자가를 만듭니다. 소뇌와 시각 피질 사이의 연결부에서 시상 대상 경로와 평행하고 복부에 있는 전방 교합과 시신경 사이의 중간점까지 두 번째 각진 교차 절단을 만듭니다. 그런 다음 브레인 블록을 시아노아크릴레이트 접착제로 각진 판에 부착합니다.

통로의 전환점 바로 위에 컷을 만듭니다. 그런 다음 플레이트를 펼치고 평평하게 한 다음 비브라토임의 챔버 스테이지에 붙입니다. 그런 다음 뇌 절편을 500마이크로미터 두께로 절편하고 얼음처럼 차가운 산소가 공급된 ACSF에 보관합니다. 슬라이스를 섭씨 32도의 기록 챔버로 옮기고 산소화된 ACSF를 1시간 동안 지속적으로 관류합니다.