쥐의 척추 기둥에서 1차 등뿌리 신경절 세포 배양 확립

쥐 척추를 예로 들어 보겠습니다. 측면을 따라 두 개의 절단과 하나의 측면 절단을 만듭니다.

등쪽 근육과 척추뼈의 등쪽 부분을 제거합니다.

척수를 추출합니다.

요추를 따라 양측에 위치한 후근 신경절 또는 DRG를 식별합니다.

DRG에는 신경교세포로 둘러싸인 뉴런이 포함되어 있습니다.

DRG를 절제하여 접시에 모으십시오. 무혈청 배지로 조직을 반복적으로 세척합니다.

DRG를 콜라게나제 용액이 들어 있는 플레이트에 옮기고 배양합니다. 콜라게나제는 세포외 기질을 분해합니다.

완충액으로 씻으십시오. 트립신-EDTA를 첨가하고 배양하여 세포-세포 접합부를 파괴하여 세포를 느슨하게 합니다.

DRG를 튜브로 옮기고 원심분리한 다음 상층액을 버립니다.

조직을 배양 배지에 재현탁하고 반복적으로 피펫팅하여 세포를 방출합니다.

부착을 용이하게 하기 위해 세포를 폴리머 코팅 배양 플레이트 웰에 옮깁니다.

배지를 제거하고 억제제와 성장 인자가 포함된 새로운 배지를 추가합니다.

억제제는 신경교세포 증식을 제한하는 반면, 성장 인자는 신경 성장을 촉진합니다.

2-3주 된 쥐의 몸통에서 요추 등근 신경절을 수집합니다. 척추의 측면을 따라 두 개의 절단을 하고 요추의 범위를 표시하기 위해 측면 절단 하나를 만드는 것으로 시작합니다. 그런 다음 뼈 절단 겸자를 사용하여 척추의 등쪽 근육을 제거합니다. 그런 다음 척추의 등쪽 부분을 제거하고 척수를 노출시킨 다음 해부 가위와 겸자를 사용하여 척수를 제거합니다.

마지막 갈비뼈에서 척추를 세어 요추 DRG를 식별합니다. 이 다이어그램은 척추뼈 위치를 보여줍니다. 마이크로 가위를 사용하여 L1에서 L6까지 12개의 양측 요추 DRG를 수집합니다. 배양의 순도를 향상시키기 위해 부착된 신경 섬유를 제거합니다. 각 요추 DRG를 2밀리리터의 얼음처럼 차가운 무혈청 배지가 들어 있는 35밀리미터 배양 접시로 옮깁니다.

DRG 함유 35mm 접시를 층류 후드로 옮기고 DRG를 무혈청 배지로 피펫으로 세 번 세척합니다. 멸균 핀셋을 사용하여 DRG를 2밀리리터의 멸균 콜라게나제 타입 1A가 들어 있는 새로운 35mm 배양 접시로 옮깁니다. 조직을 섭씨 37도 조직 배양 인큐베이터의 콜라게나제 용액에 30분 동안 넣어 세포의 해리를 시작합니다.

배양 후 콜라게나제 용액을 제거하고 행크의 균형 소금 용액 2밀리리터에 DRG를 세 번 세척합니다. 다음으로, 미리 예열된 0.05% 트립신-EDTA 2밀리리터를 접시에