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신경과학
0 조회수 • 2:52 분 • July 8th, 2025
분화 배지-1 또는 DM-1에 신경 전구 세포 또는 NPC 응집체를 포함하는 웰로 시작합니다.
이러한 NPC는 통제된 조건에서 DM-1을 사용하여 인간 유도만능 줄기 세포 또는 hiPSC에서 생성된 신경 계통의 전구체입니다.
NPC 응집체를 DM-1이 들어 있는 웰 내부에 배치된 멤브레인 인서트로 옮기고 여분의 배지를 제거합니다.
배지를 DM-2로 변경하고 배양합니다.
DM-2는 NPC가 다양한 신경 세포 유형으로 성숙하는 것을 촉진하는 영양소와 분화 인자를 제공합니다.
미분화 NPC는 배지에 혈청이 부족하기 때문에 무혈청 배아체 또는 SFEB로 알려진 배아체로 변형됩니다. 이 EB는 발달 중인 뇌의 형태와 유사합니다.
인서트를 DM-3이 들어 있는 웰에 옮깁니다.
DM-3에는 SFEB의 유지 및 성장에 필수적인 성장 인자가 포함되어 있습니다.
SFEB가 원하는 크기에 도달할 때까지 배양합니다.
세포를 배양한 지 2주 후, 40미크론 세포 배양 인서트와 DM1 배지 1밀리리터가 있는 6웰 플레이트를 준비합니다. 배양된 세포를 추가하기 전에 이 플레이트를 최소 4시간 동안 배양합니다.
다음으로, 200마이크로리터의 넓은 입 피펫 팁을 사용하여 약 20마이크로리터의 배지로 2주 된 세포 응집체를 수집합니다. 최소한의 용액으로 4-6개의 응집체를 각 인서트에 옮깁니다. 초과분을 제거하십시오.
이 단계에서는 빠르고 꾸준한 손으로 작업하는 것이 중요합니다. SFEB 주변에서 매체를 제거하는 동안 표면 장력으로 인해 SFEB가 용액을 가로질러 이동하는 것을 볼 수 있습니다. 매체를 제거한 후 위치를 변경해도 괜찮습니다.
모든 응집체가 인서트에 로드되면 배지를 DM2 1밀리리터로 변경하고 세포를 계속 배양합니다. 격일로 배지의 3/4을 신선한 배지로 교체하십시오. 배양 14일 후, 배양에 DM3 배지를 첨가하기 시작합니다. SFEB를 성장시키기 위해 16일 더 배양을 계속합니다.