Patch Clamp 방법을 통한 전체 셀 구성 설정

0 조회수3:12 • July 8th, 2025

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

신경 생존력을 유지하기 위해 인공 뇌척수액으로 채워진 전기생리학 설정의 기록 챔버에 고정된 마우스 뇌 절편으로 시작합니다.

설정에는 증폭기 및 압력 제어 장치에 연결된 사전 조립된 양이온 용액으로 채워진 기록 마이크로피펫이 포함되어 있습니다.

현미경으로 뉴런을 찾아 마이크로피펫을 그 근처에 놓습니다.

양압을 가하여 잔해물을 치우십시오.

멤브레인에 보조개가 형성되어 뉴런 근접성을 나타낼 때까지 마이크로피펫을 뉴런 쪽으로 움직입니다.

약한 흡입력을 가하여 마이크로피펫 내부의 작은 멤브레인 패치를 당깁니다.

이렇게 하면 마이크로피펫 저항을 증가시키는 단단한 밀봉이 생성되어 안정적인 밀봉이 확인됩니다.

세포 안정성을 위해 생리학적 휴식 잠재력에서 세포의 잠재력을 유지합니다.

그런 다음 짧고 강한 흡입을 가하여 패치 멤브레인을 파괴하고 세포 내부와 직접 연결됩니다.

이 전체 세포 구성은 뉴런 전기적 활동을 기록할 준비가 되어 있습니다.

현미경의 미세 초점 휠을 사용하여 마이크로피펫을 서서히 내리면서 초점을 낮추기 시작합니다. 항상 먼저 초점을 낮춘 다음 마이크로피펫 팁이 슬라이스에 갑자기 침투하지 않도록 마이크로피펫을 초점면으로 내립니다. 마이크로피펫이 슬라이스 표면에 닿으면 마이크로매니퓰레이터 속도를 중저 모드로 낮춥니다. 가벼운 양압을 부드럽게 가하여 경로의 잔해물을 제거합니다.

그런 다음 X, Y, Z 컨트롤 노브를 번갈아 가며 사용하거나 Z축 노브의 회전에 따라 두 XZ 축이 변경되는 대각선으로 접근하여 셀에 접근합니다. 마이크로피펫이 세포에 충분히 가까우면 세포 표면에 보조개가 나타납니다.

이제 밀봉을 만들기 위해 피펫 홀더 흡입 튜브에 연결된 튜브를 통해 약하고 짧은 흡입을 가합니다. 기가씰이 형성되는 동안 컴퓨터로 제어되는 증폭기 사령관을 사용하여 세포의 보유 전위를 생리적 휴식 전위로 가져와 막이 파열된 후 갑작스러운 변화를 방지합니다. 기가씰이 형성된 후 빠르거나 느린 정전 용량을 보상하십시오.

여기서 적용되는 흡입력이 너무 강하지 않은 것이 매우 중요하며, 그렇지 않으면 밀봉을 설정하기 전에 멤브레인이 파열될 수 있습니다.

씰이 안정적으로 유지되고 1기가옴 이상이면 짧고 강한 흡입을 가하여 원형질막을 파열시킵니다.

흡입은 짧아야 하며 멤브레인을 적절하게 파열하고 안정적인 전체 셀 구성을 달성하기 위해 밀봉을 설정할 때 가해지는 압력보다 강

해야 합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026