JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:40 분 • July 8th, 2025
다중 전극 어레이 또는 MEA에서 나선형 신경절 뉴런 배양으로 시작합니다.
MEA는 회로를 통해 접점에 연결된 기록 전극으로 구성됩니다.
MEA를 세척하여 미디어를 제거하고 접점을 건조시켜 녹음 중 습기로 인한 노이즈를 방지하십시오.
MEA를 홀더에 장착하고 녹음 설정에 설치합니다.
MEA 접점은 전기 신호를 녹음 설정으로 전송하는 홀더 커넥터와 정렬됩니다.
세포외 환경 모방 용액을 추가하여 뉴런의 정상적인 생리적 활동을 허용합니다.
녹음을 시작합니다. 전극은 뉴런에 의해 생성된 자발적인 신호 또는 활동 전위를 감지하여 소프트웨어 인터페이스에서 스파이크로 시각화합니다.
이제 자발적인 활동을 나타내는 하나의 전극에 전기 펄스를 가합니다.
펄스는 전기장을 생성하여 인접한 전극의 뉴런을 자극합니다.
자극 의존 활동을 기록합니다.
마지막으로 전압 개폐 이온 채널을 차단하여 활동 전위 생성을 방지하는 신경독을 추가합니다.
신호를 녹음하여 배경 소음을 식별합니다.
총 18일의 배양 후, 실온에서 이전에 준비된 세포외 용액으로 MEA 배양액을 세척합니다. 그런 다음 MEA 칩의 접점을 조직 조각으로 건조시키고 MEA 홀더에 MEA를 장착합니다. 마지막으로 녹음 설정에 MEA를 설치합니다.
그런 다음 300마이크로리터의 세포외 용액을 추가하고 기록하기 전에 시스템이 안정화될 때까지 10분 동안 기다립니다. 이제 모든 전극에서 2분 동안 자발적인 활동을 기록하고 활성 전극을 식별합니다. 그런 다음 자극에 반응하는 전극을 식별합니다.
자극 아티팩트를 배제하려면 동일한 전극에서 10회 자극합니다. 배양이 10회 중 8회 이상 반응하면 전극 유도 자극에 대한 양성 반응으로 가정할 수 있습니다. 배경 소음을 식별하려면 TTX를 1마이크로몰 농도로 배양액에 적용하여 전압 개폐 나트륨 채널을 차단한 다음 2분 동안 기록합니다.