0 조회수 • 3:45 분 • July 8th, 2025
내측 전정핵(MVN)을 포함하는 마우스 뇌간 절편을 가져 가십시오.
신경 생존력을 유지하기 위해 인공 뇌척수액으로 채워진 기록 챔버에 슬라이스를 고정합니다.
현미경으로 슬라이스를 시각화하여 MVN 뉴런을 찾습니다.
양압을 가하여 세포내 환경 모방 용액으로 채워진 마이크로피펫을 조직을 통해 전진시킵니다.
피펫이 뉴런에 접촉하면 뉴런막이 움푹 들어갑니다.
음압을 가하여 작은 멤브레인 부분을 흡인하여 단단히 밀봉합니다.
다음으로, 음압 펄스를 가하여 멤브레인을 파열시켜 뉴런과 피펫 사이에 지속적인 연결을 만듭니다.
뉴런에 임의의 노이즈 진폭을 적용하고 노이즈가 뉴런 발화를 유도하는 임계값 이하 진폭을 식별합니다.
마지막으로, 임계값 이하 무작위 노이즈 진폭과 결합된 뉴런에 다양한 전기 자극을 적용합니다.
뉴런 이득 측정 — 소음이 있는 상태에서 자극에 대한 발화 반응을 조절하는 뉴런의 능력.
전체 세포 패치 클램프 전기생리학의 경우, 먼저 칼륨 기반 내부 용액으로 채워졌을 때 최종 저항이 3-5메가옴인 마이크로피펫을 당겨 수조에 넣습니다. MVN의 개별 뉴런에서 전체 세포 패치 클램프 기록을 얻으려면 배양 챔버에서 표준 전기생리학적 설정의 기록 챔버로 단일 조직 슬라이스를 옮기고 U자형 추에 나일론 실을 사용하여 슬라이스를 고정합니다.
분당 3밀리리터의 유속으로 섭씨 25도의 탄소화 aCSF로 기록 챔버를 지속적으로 관류하고 마이크로피펫에 내부 용액을 채웁니다. 피펫을 사용하여 소량의 양압을 가하여 피펫 팁에서 이물질을 밀어냅니다. MVN 내에서 개별 뉴런을 찾기 위해 고전력 대물렌즈를 사용하여 MVN을 찾습니다.
피펫으로 조직을 뚫기 전에 소량의 양압을 가하여 피펫 팁에서 파편을 밀어내고 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 피펫을 선택한 뉴런 쪽으로 이동합니다. 신경막에 작은 보조개가 형성되어야 합니다. 양압을 해제하고 소량의 음압을 가합니다.
1기가옴 밀봉이 달성되면 흡입 포트를 통해 피펫 홀더에 부드럽고 짧고 날카로운 음압을 가하여 멤브레인을 파열시키고 전체 셀 구성을 만듭니다. 그런 다음 표준 프로토콜에 따라 전체 셀 전류 클램프 기록을 얻습니다.
개별 내측 전정핵 뉴런에 확률론적 및 정현파 노이즈를 적용하려면 진폭 범위를 3에서 24피코암페어로 설정하여 뉴런 역치와 발화 속도를 결정하고 더 낮은 자극 강도와 더 높은 자극 강도를 그룹화하여 감각 역치를 결정합니다.
다음으로, 각 개별 전류 레벨에 대해 탈분극 전류 단계가 주입되는 10초 동안의 평균 발사 속도를 계산합니다. 평균 발사 속도 값을 사용하여 현재 플롯에 대한 발사 속도를 생성합니다. 그런 다음 선형 회귀 분석을 수행하여 뉴런 이득을 결정하기 위해 가장 적합한 선의 기울기를 결정합니다.